10.12.2012
Ogrodnictwo, sem.III, gr.3
SPRAWOZDANIE nr 5
Oznaczanie aktywności enzymów amylolitycznych
Cel: Celem ćwiczenia było poznanie metod oznaczania aktywności enzymów amylolitycznych na podstawie pomiaru przyrostu redukcyjności mieszaniny reakcyjnej oraz na podstawie zmiany zabarwienia skrobi z jodem.
W metodzie redukcyjności w mieszaninie reakcyjnej wykorzystuje się właściwości redukujące cukrów powstałych podczas enzymatycznej hydrolizy polisacharydów.
Stężenie maltozy dla absorbancji 0,656 wynosi 810 µg maltozy/ml
810 µg maltozy – 1 ml
x – 0,5 ml => x = 405 µg maltozy
0,2 ml enzymu uwalnia 405 µg maltozy
10 ml enzymu uwalnia – x => x = 20250 µg = 20,25 mg maltozy
Do kolbki nr 6 wlano 1,5 ml wyciągu z trzustki.
1,5 ml wyciągu uwolni 20,25 mg maltozy
1000 ml enzymu uwolni x => x= 13,5 g maltozy
Masa cząsteczkowa maltozy wynosi 342, stąd aktywność enzymów amylolitycznych wynosi:
$$\frac{13,5\ g\ maltozy}{342g/mol} = 0,0395\ mola\ maltozy = 39,5\ mmola$$
$$\frac{39,5\ mmola\ }{15\ min} = 2,63\ mmola\ maltozy/min$$
$$\frac{2,63\ }{1g} = 2,63\ mmola\ maltozy/min/g$$
Metoda wykorzystująca zdolność skrobi do tworzenia kompleksu z jodem
W metodzie tej mierzymy ilość rozłożonej skrobi na podstawie zmiany intensywności zabarwienia.
10mg – 0,667
x – 0,243 x = 3,64 mg skrobi rozłożonej przez 1 ml roztworu enzymu
W kolbce było 36,4 mg
1,5 ml – 36,4 mg
1000 ml – x x= 24266,67 mg skrobi czyli 24,67 g
24,67g skrobi / 15 minut = 1,64 g skrobi/min
1,64 g skrobi / gram trzustki = 1,11 g skrobi x min-1 x g-1 trzustki