2011-03-21
1
Konserwacja nasienia psa
i sztuczna inseminacja suki
Dr hab. Wojciech Niżaoski
Katedra Rozrodu z Kliniką Zwierząt Gospodarskich
Konserwacja nasienia w stanie płynnym
Polega na rozrzedzeniu nasienia w specjalnym płynie,
schłodzeniu do temperatury lodówki 5
o
C
Nasienie przeżywa 3-15 dni
Zależne od wielu czynników
NAJCZĘSTSZA PRZYCZYNA ???
TRANSPORT!!! „POWTÓRKI”
UNASIENIANIA itp
OGRANICZONA DOSTĘPNOŚĆ
SAMCA!!!
Konserwacja nasienia w stanie płynnym
Pobranie II frakcji nasienia i ocena wstępna
Rozrzedzenie nasienia w 33
o
C 1:1-1:3-1:5
Wolne (1-1,5 godz.)
schładzanie do 5
o
C
Schładzanie do 5
o
C termosu na
nasienie
Zapakowanie szczelnie zamkniętych probówek z
nasieniem w termosie z lodem i wysyłka
Najbardziej optymalne pojemniki neoporowe
Pojemnik neoporowy do transportu nasienia schłodzonego
Rozrzedzalniki
1.
Bufor TRIS
30,28
fruktoza
12,15
kwas cytrynowy
17,80
aqua dest.
ad
1000,0
8 części r-ru macierzystego wymieszad z 2 częściami żółtka
r-r macierzysty
2. Rozrzedzalniki firmowe np. Canine Chilled
3. Mleko poddane wysokiej pasteryzacji 92
o
C 8 min
Rozrzedzalniki powinny zawierad antybiotyki
penicillin 100 000 jm/100 ml
streptomycin
100 mg/100 ml
Inseminacja nasieniem konserwowanym w stanie płynnym
•stopniowe ogrzanie nasienia
•kontrola ruchliwości plemników
•przeprowadzenie inseminacji domacicznej, ewentualnie dopochwowej
•dogodny termin inseminacji: 2-6 dzieo cyklu rujowego
•2-3 krotna inseminacja, co 48 godzin
2011-03-21
2
Konserwacja nasienia w niskich temperaturach
Zamrożenie do -196
o
C
Przechowywanie wiele lat
Cele ???
Transport
Zupełna niezależnośd
czasowa pobierania i
inseminacji suki
Banki nasienia
Rezerwa
genetyczna
cennych samców
„Zabezpieczenie” na
wypadek chorób psa
Wymiana międzynarodowa i
międzykontynetalna
Konserwacja nasienia w niskich temperaturach
Pobranie II frakcji nasienia i ocena wstępna Rozrzedzenie
wstępne 33
o
C
Rozrzedzenie wyrównawcze 22
o
C
Rozrzedzenie ostateczne 5
o
C. +GLICEROL!
Mrożenie w słomkach w parach azotu -140
o
C
30 min
60 min
90 min
Ciekły azot -196
o
C
ekwilibracja
Mrożenie nasienia
Nasienie w kontenerach przebywad
może przez nieograniczony czas
Rozrzedzalniki
1.
Bufor TRIS
30,28
fruktoza
12,15
kwas cytrynowy
17,80
aqua dest.
ad
1000,0
8 części r-ru macierzystego wymieszad z 2 częściami żółtka
r-r macierzysty
Dodatek glicerolu: na każde 100 ml rozrzedzalnika powinno
przypadad 4-6 ml gliceryny
Rozmrażanie nasienia i inseminacja
• Rozmrażanie w łaźni wodnej
• 0,5 ml słomki w 37
o
C przez 60 sek.
• 0,5 ml słomki w 70
o
C przez 6 sek.
• 0,25 ml słomki w 37
o
C przez 30 sek.
• Kontrola ruchliwości plemników po rozmrożeniu (min. 40%)
• Dawka inseminacyjna 150-200 mln. plemników ruchliwych
• Konieczna inseminacja domaciczna
• Inseminacja dzieo po dniu 2x pomiędzy 4-7 dniem cyklu rujowego
2011-03-21
3
Department and Clinic of Reproduction
Date ...........................
Faculty of Veterinary Medicine
University of Agriculture in Wrocław
Pl. Grunwaldzki 49, 50–366 Wrocław
Poland
Tel. (48) 71 3205 315
e–mail:
nizanski@ozi.ar.wroc.pl
Canine Semen Evaluation and Conservation Form
Owner .............................................................. Adress ...................................................................
Dog’s Name, Reg .......................................................................................................
Breed ............................................... Color ................................ Age ............. Proven YES NO
Semen evaluation:
Date of collection .................................
Volume .................................................... Color ............................ Viscosity ..................................
pH ................. Percentage of prog. motility ............ %
Concentration of sperms per mL ...................... of 2
nd
fraction; TOTAL count of sp.......................
Morphology
Primary defects ...................................
WBC .................................
RBC ...................................
Epithelial cells ....................
Other comments .................
Secondary defects ..............................
Total abnormal ...................................
Testicular and epididymal size, consistency and symmetry ........................................................
.......................................................................................................................................................
Diagnosis ......................................................................................................................................
Preservation: Chilled semen
Extender used ..................................................................................................
Semen/Extender Ratio .....................................................................................
Date and time of dilution .................................................................................
Motility after dilution .........................
Motility after cooling ..........................
Number of spermatozoa in extended ejaculate ................................................
Comments (shipment conditions, insemination technique) ..........................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
Cryopreservation:
Extender used ................................................................................................................................
Packaging system ..........................................................................................................................
Motility after thawing (control sample) ........................................................................................
Number of sperms per one straw ..................................................................................................
Shipment of cryopreserved semen:
Number of insemination doses / straws shipped ...........................................................................
Number of sperms per straw ..........................................................................................................
Insemination dose – suggestions ....................................................................................................
Preferred method of thawing and insemination .............................................................................
.........................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................
Department and Clinic of Reproduction
Faculty of Veterinary Medicine
University of Environmental and Life Sciences
Pl. Grunwaldzki 49
50-366 Wrocław
Poland
Phone +48 71 3205315 (302)
Mobile +48 605 543 183
e-mail:
wojtek.nizanski@interia.pl
CERTIFICATE OF COLLECTION OF DOG SEMEN
Name of dog: ……………………..……..
KC Reg No………………………….
Breed ……………………………………...
Date of birth………………………...
ID………………………………………….
Veterinary certificate
I hereby certificate that the dog described abovewas presented for semen collection on ………….
From the collection resulted
1. ………………. 0.5 mL straws
or
2………………… mL of fresh semen
The semen can be identified as follows
……………………………………………………………………………………………………….
Colour of straws/plug …………………………………………..
Type of extender…………………………………………………
Recommended thawing procedure ………………………………………………………………….
Recommended number of straws per AI ……………………………………………………………
Semen quality (if frozen - post-thaw): Excellent Good Acceptable Sub-standard
Total number of spermatozoa ………………………………. Motility ……………………..
Number of spermatozoa per straw …………………………. Abnormal sperm ……………
AT THE TIME OF SEMEN COLLECTION THE SEMEN DONOR WAS CLINICALLY EXAMINED AND WAS
FOUND FREE FROM SIGNS OF ANY DISEASE. HE HAS TWO NORMAL TESTICLES, FULLY DESCENDED IN
THE SCROTUM.
Signature of veterinarian ……………………………………………………………………….
Printed name……………………………………………………………………………………
Adress ………………………………………………………………………………………….
Phone
+48 71 3205 315
e-mail:
wojtek.nizanski@interia.pl
Declaration by stud owner
I hereby certify that the above dog, from which semen has been collected, is the alleged dog, and that it rightfully belongs to me.
Signature of owner…… ……………………………………………………………………….
Printed name……………………………………………………………………………………
Adress ………………………………………………………………………………………….
Phone …………………………………. Fax, e-mail ………………………………………….
Department and Clinic of Reproduction
Faculty of Veterinary Medicine
University of Environmental and Life Sciences in Wrocław
Pl. Grunwaldzki 49, 50-366 Wrocław, Poland
Phone +48 71 3205315 (302), Mobile +48 605 543 183, e-mail:
wojtek.nizanski@interia.pl
INSEMINATION
SHIPMENT OF SEMEN
TRANSFER OF OWNERSHIP
TRANSFER STORAGE LOCATION
DISCONTINUE
I CERTIFY THAT I AM THE ( ) OWNER ( ) CO-OWNE OF FROZEN SEMEN AT LABORATORY
OF DONOR (breed) ………………………………………….., reg no …………………………………….
Reg name …………………………………………………………………………………………………….
I authorize ……………………………………………………………………………………………………
STRAW UNITS IDENTIFIED BELOW TO THE FOLLOWING
TO:
DATE…………………..
NAME……………………………………………………………………..
ADDRESS………………………………………………………………...
CITY…………………………….. COUNTRY …………………………
PHONE, E-MAIL…………………………………………………………
SHIPMENT FOR INSEMINATION OF BITCH
Breed …………………………… reg no ……………………………….
Reg name ………………………………………………………………..
Owner of the bitch Co-owner Lessee of bitch
Name ……………………………………………………………………
Adress …………………………………………………………………..
City ……………………………… Country ……………………………
Phone, e-mail ……………………………………………………………
I authorize the above transaction and certify I am the legal owner of the
frozen semen of donor listed above.
Signature ………………………………………………………………..
Printed name ……………………………………………………………
Address …………………………………………………………………
City ………………………….. Country ……………………………..
Phone, e-mail …………………………………………………………..
Shipping or transfer date………………………. Technician signature ………………………………..
of frozen semen
Semen ID
Date Stud ID StrawID
TOT
Sztuczna inseminacja
Sztuczna inseminacja suk
Awersja
Suki dominujące
Nadpobudliwośd,
agresja
Wąskośd pochwy
Dysproporcja wielkości
Rasy predysponowane
Konserwacja nasienia
Życzenie właściciela
Sztuczna inseminacja
suk
•bezwzględnie należy ustalid optymalny termin unasienniania
•inseminacja do 5-10 min. po pobraniu, rozmrożeniu, ogrzaniu
nasienia
•przed inseminacją każdorazowo ocena wstępna nasienia
•sprzęt inseminacyjny musi byd ogrzany
•dawka inseminacyjna 150-200 mln plemników
•objętośd zwykle 1-5 ml
•ruchliwośd nasienia świeżego >70%
•ruchliwośd nasienia konserwowanego >40%
2011-03-21
6
Budowa anatomiczna pochwy
Inseminacja dopochwowa
- przeprowadzana przy unasiennianiu nasieniem świeżym
- nie stosowana przy wykorzystaniu nasienia rozmrożonego
Dawka inseminacyjna
150 mln plemników o ruchu prawidłowym
w objętości 0,5-5 ml
Inseminacja dopochwowa-technika
Skutecznośd sztucznej inseminacji suk
nasieniem świeżym (n=81)
Odsetek suk
szczennych
Średnia
liczebnośd
miotu
Samice
Samce
Odsetek
szczeniąt żywo
urodzonych
75,9%
6,1
2,9
3,2
88,3%
powietrze
nasienie
nasienie
powietrze
Inseminacja dopochwowa - technika
Prawidłowe wprowadzenie pipety z lateksowym
balonikiem uszczelniającycm
(kateter Foleya lub „Osiris gun”)
