Biochemia dla Biologii nr ETCS
Oznaczanie kwasu askorbinowego w materiale biologicznym
Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii
Przedmiot prowadzony przez Katedrę Biochemii
1
ZADANIE 6
TYTUŁ: OZNACZANIE KWASU ASKORBINOWEGO W MATERIALE BIOLOGICZNYM
Forma zaliczenia: Kolokwium z części teoretycznej do ćwiczeń oraz praktyczne zaliczenie
ć
wiczeń
Materiały i urządzenia:
• Materiały
1. warzywa i owoce przyniesione przez studentów
2. roztwór kwasu askorbinowego
3. 2,6-dichlorofenoloindofenolu
4. 3% kwas metafosforowy
• Urządzenia
1. probówki
2. biurety
3. zlewki
4. pipety
5. moździerze
INFORMACJE TEORETYCZNE:.
Wyznaczenie miana ma na celu określenie ilości mililitrów stosowanego roztworu
barwnika na 1 mg kwasu askorbinowego. Roztwór barwnika jest nietrwały, dlatego jego
miano nastawia się bezpośrednio przed doświadczeniem.
Kwas L-askorbinowy redukuje barwnik 2,6-dichlorofenoloindofenol, sam zaś ulega
utlenieniu do kwasu dehydroaskorbinowego. Oznaczanie kwasu askorbinowego polega na
miareczkowaniu ww. barwnikiem ekstraktu z materiału biologicznego w kwaśnym
ś
rodowisku, co zapobiega samoutlenieniu kwasu askorbinowego tlenem z powietrza oraz
chroni przed działaniem oksydaz. Barwnik jest zarazem indykatorem. Po wyczerpaniu
witaminy C zabarwia on miareczkowana próbę na kolor bladoróżowy.
Przebieg doświadczenia:
Podzadanie 1: wyznaczenie miana roztworu 2,6-dichlorofenoloindofenolu
Roztwór kwasu askorbinowego o znanym stężeniu zmiareczkować roztworem
barwnika, wynik podać w ml barwnika/ mg kwasu.
Podzadanie 2: oznaczenie witaminy C w materiale biologicznym
Odważyć 2 g mokrej tkanki (ziemniaki, kapusta, cytryna, jabłko, pomidor,
pokrzywa, owoce jarzębiny, itp.) i rozetrzeć w moździerzu z 5 ml 3% kwasu
metafosforowego. Roztartą miazgę przenieść ilościowo do cylinderka i uzupełnić
do 10 ml kwasem metafosforowym. Przesączyć, z przesączu odmierzyć 1 do 5 ml
i miareczkować mianowanym roztworem barwnika aż do utrzymującej się 30 s
barwy różowej. Wykonać miareczkowanie próby ślepej, tzn. użytego kwasu
metafosforowego. Wartość uzyskaną odjąć od otrzymanej w próbie właściwej.
Wyniki przedstawić w tabelach.
Biochemia dla Biologii nr ETCS
Oznaczanie kwasu askorbinowego w materiale biologicznym
Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii
Przedmiot prowadzony przez Katedrę Biochemii
2
A
B
C
D
E = 0,2 [g/ml] x D
S = (C-B) x 100 [g] /
(A x E)
Miano
barwnika,
[ml/mg]
Miareczko-
wanie próby
ślepej, [ml]
Miareczko-
wanie próby
badanej, [ml]
Obj. przesączu
pobrana do
oznaczenia, [ml]
Masa próbki
pobrana do
oznaczenia, [g]
Zawartość kwasu
askorbinowego w
100 g próbki, [mg]
Dzienna dawka witaminy C dla dorosłego człowieka wynosi 60 mg. Oblicz ilość materiału
biologicznego, który zaspokajałby dzienne zapotrzebowanie na te witaminę.
L.p
.
Badany materiał biologiczny
Ilość zaspakajająca dzienne zapotrzebowanie na
witaminę C u dorosłego człowieka, [g]
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Wniosek:
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
Biochemia dla Biologii nr ETCS
Oznaczanie kwasu askorbinowego w materiale biologicznym
Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii
Przedmiot prowadzony przez Katedrę Biochemii
3
LITERATURA
1. Biochemia”, L. Stryer, PWN, Warszawa 1997 i nowsze
2. „Biochemia Harpera”, R. K. Murray i wsp., PZWL, Warszawa 1995 i nowsze
3. Cytobiochemia”, L. Kłyszejko-Stefanowicz, PWN, Warszawa 1995, 2002
4. Biochemia- Krótkie Wykłady”, B. D. Hames i wsp., PWN, Warszawa 2002
5. Zarys Biochemii Cz.1, Karlson P., Pwn W-Wa 1987
6. Biochemia witamin PWN, Moszczyński, Pyć w-wa 1998
7. Biochemia kręgowców, Minakowski W. PWN W-wa 1998
8. Fizjologia komórki, Giese A., PWN W-wa 1985
9. Chemia bionieorganiczna, Kafarski P., Lejczak B. PWN Warszawa 1994
10. Elementy enzymologii, Wytwicki J. i inni, PWN 1989
11. Podstawy biofizyki, Pilawski, PWN Warszawa
12. Podstawy cytofizjologii, Kawiak J. i inni PWN, Warszawa 1996
13. Ćwiczenia z biochemii”, L. Kłyszejko-Stefanowicz, PWN, Warszawa 1999, 2003
14. Ćwiczenia z biochemii, Strzeżek J wyd. ART. 1997
15. Ćwiczenia z biochemii, Logoń A. wyd. ART. 1997