Witaminy i przeciwutleniacze w żywności

SPRAWOZDANIE 1

Imię i nazwisko	Katarzyna Kośmider
Temat ćwiczenia	Analiza przeciwutleniaczy w produktach żywnościowych
Data wykonania ćwiczenia	25.03.2010
Zaliczenie

1. Wstęp teoretyczny

2. Cel przeprowadzenia ćwiczenia

Celem ćwiczenia jest ocena aktywności antyoksydacyjnej wybranych produktów metodą ABST oraz oznaczenie ogólnej zawartości polifenoli metodą kolorymetryczną
z odczynnikiem Folin - Ciocalteu.

3. Wykonanie oznaczenia

Oznaczenia wykonano wg instrukcji: „Witaminy i przeciwutleniacze w żywności, analiza przeciwutleniaczy w produktach żywnościowych, część praktyczna”.

4. Wyniki pomiarów i obserwacje

1. Ocena aktywności antyoksydacyjnej zielonej herbaty i soku jabłkowego metodą ABTS

W probówkach typu Eppendorf przygotowano rozcieńczenia 1mM roztworu Troloxu w PBS
i zmierzono jego absorbancję przy długości fali λ=734nm.

L.p.	Stężenie końcowe standardu [mg/100ml]	Objętość PBS [µl]	Objętość 1 mM Troloxu [µl]	Absorbancja przy długości fali λ=734nm
1	0	200	0	0,6011
2	1,25	190	10	0,3555
3	2,5	180	20	0,2253
4	5	160	40	0,0041
5	7,5	140	60	0,0034
6	10	120	80	0,0000

Na podstawie pomiaru absorbancji wszystkich roztworów Troloxu (z pominięciem próbki numer 5 i 6) wykreślono krzywą wzorcową o parametrach:

R² = 0,9604

y = -0,1146x + 0,5471

x =

W probówkach typu Eppendorf przygotowano kolejne rozcieńczenia ekstraktów z zielonej herbaty i soku jabłkowego w PBS, a następnie dokonano pomiaru absorbancji próbek przy długości fali λ=734nm.

Badany roztwór zielonej herbaty	Absorbancja przy długości fali λ=734nm
rozcieńczenie 100-krotne	4,1230
rozcieńczenie 200-krotne	1,0754
rozcieńczenie 500-krotne	0,7560
rozcieńczenie 1000-krotne	0,1175

Badany roztwór soku jabłkowego	Absorbancja przy długości fali λ=734nm
rozcieńczenie 2-krotne	4,8115
rozcieńczenie 5-krotne	4,7955
rozcieńczenie 10-krotne	0,5367

Z wyników pomiaru absorbancji zamieszczonych w tabeli wyliczono aktywność przeciwutleniającą badanych ekstraktów z zielonej herbaty i soku jabłkowego (w mg Troloxu/100ml ekstraktu) z uwzględnieniem rozcieńczenia roztworów. Ze względu na to, że wartość absorbancji niektórych próbek nie mieściła się w przedziale wartości absorbancji krzywej wzorcowej obliczeń dokonano tylko dla dwóch próbek.

Obliczenia dla ekstraktu z zielonej herbaty:

• Rozcieńczenie 1000-krotne:

x =
= 3,7487 [mg Troloxu/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

5,8211 ×1000 = 3748,7 [mg Troloxu/100ml ekstraktu]

Obliczenia dla ekstraktu z soku jabłkowego:

• Rozcieńczenie 10-krotne:

x =
= 0,0908 [mg Troloxu/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,0908×10 = 0,908 [mg Troloxu/100ml ekstraktu]

1. Oznaczenie zawartości polifenoli ogółem

Z roztworu standardowego (+)katechiny o stężeniu 50mg/100cm³ (w metanolu) przygotowano rozcieńczenia do krzywej wzorcowej.

Rozcieńczenie pierwsze:

50mg (+)katechiny - 100cm³

x₁ - 0,5cm³

x₁ =
= 0,25 [mg (+)katechiny w 25cm³ roztworu metanolowego]

0,25mg (+)katechiny - 25cmł

x₂ - 5cmł

x₂ =
= 0,05 [mg (+)katechiny w 50cm³ roztworu]

0,05mg (+)katechiny - 50cm³

x₃ - 100cm³

x₃ =
= 0,1 [mg (+)katechiny w 100cm³ roztworu wzorcowego]

Rozcieńczenie drugie:

50mg (+)katechiny - 100cm³

x₁ - 1,25cm³

x₁ =
= 0,625 [mg (+)katechiny w 25cm³ roztworu metanolowego]

0,625mg (+)katechiny - 25cm³

x₂ - 5cm³

x₂ =
= 0,125 [mg (+)katechiny w 50cm³ roztworu]

0,125mg (+)katechiny - 50cm³

x₃ - 100cm³

x₃ =
= 0,25 [mg (+)katechiny w 100cm³ roztworu wzorcowego]

Rozcieńczenie trzecie:

50mg (+)katechiny - 100cmł

x₁ - 2,5cmł

x₁ =
= 1,25 [mg (+)katechiny w 25cm³ roztworu metanolowego]

1,25mg (+)katechiny - 25cmł

x₂ - 5cmł

x₂ =
= 0,25 [mg (+)katechiny w 50cm³ roztworu]

0,25mg (+)katechiny - 50cm³

x₃ - 100cm³

x₃ =
= 0,5 [mg (+)katechiny w 100cm³ roztworu wzorcowego]

Rozcieńczenie czwarte:

50mg (+)katechiny - 100cm³

x₁ - 3,75cm³

x₁ =
= 1,875 [mg (+)katechiny w 25cm³ roztworu metanolowego]

1,875mg (+)katechiny - 25cm³

x₂ - 5cm³

x₂ =
= 0,375 [mg (+)katechiny w 50cm³ roztworu]

0,375mg (+)katechiny - 50cm³

x₃ - 100cm³

x₃ =
= 0,75 [mg (+)katechiny w 100cm³ roztworu wzorcowego]

Rozcieńczenie piąte:

50mg (+)katechiny - 100cm³

x₁ - 5cm³

x₁ =
= 2,5 [mg (+)katechiny w 25cm³ roztworu metanolowego]

2,5mg (+)katechiny - 25cm³

x₂ - 5cm³

x₂ =
= 0,5 [mg (+)katechiny w 50cm³ roztworu]

0,5mg (+)katechiny - 50cm³

x₃ - 100cm³

x₃ =
= 1 [mg (+)katechiny w 100cm³ roztworu wzorcowego]

Z przygotowanych roztworów wzorcowych dokonano pomiaru absorbancji przy długości fali λ=760nm

L.p.	Ilość pobranego roztworu (+)katechiny o stężeniu 50mg/100cm^3 [cm^3]	Zawartość (+)katechiny w 25cm^3 roztworu metanolowego [mg]	Stężenie (+)katechiny w 100cm^3 roztworu wzorcowego [mg/100cm^3]	Absorbancja przy długości fali λ=760nm
1	0	0	0	0,2763
2	0,5	0,25	0,1	0,0608
3	1,25	0,625	0,25	0,1342
4	2,5	1,25	0,5	0,2034
5	3,75	1,875	0,75	0,2062
6	5	2,5	1	0,2053

Na podstawie pomiaru absorbancji wszystkich roztworów wzorcowych (+)katechiny
(z pominięciem próbki numer 1 i 6) wykreślono krzywą wzorcową o parametrach:

R² = 0,8419

y = 0,221x + 0,0628

x =

Przygotowano próbki ekstraktu z zielonej herbaty oraz soku jabłkowego, a następnie dokonano pomiaru ich absorbancji przy długości fali λ=760nm.

Badany roztwór zielonej herbaty	Absorbancja przy długości fali λ=760nm
rozcieńczenie 100-krotne	0,0668
rozcieńczenie 200-krotne	0,1407
rozcieńczenie 500-krotne	0,1705
rozcieńczenie 1000-krotne	0,2192

Badany roztwór soku jabłkowego	Absorbancja przy długości fali λ=734nm
rozcieńczenie 2-krotne	0,0192
rozcieńczenie 5-krotne	0,1758
rozcieńczenie 10-krotne	0,2354
rozcieńczenie 50-krotne	0,1483

Z wyników pomiaru absorbancji zamieszczonych w tabeli wyliczono zawartość polifenoli ogółem badanych ekstraktów z zielonej herbaty i soku jabłkowego (w mg (+)katechiny/100ml ekstraktu) z uwzględnieniem rozcieńczenia roztworów.

Obliczenia dla ekstraktu z zielonej herbaty:

• Rozcieńczenie 100-krotne:

x =
= 0,0181 [mg (+)katechiny/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,0181×100 = 1,81 [mg (+)katechiny/100ml ekstraktu]

• Rozcieńczenie 200-krotne:

x =
= 0,3525 [mg (+)katechiny/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,3525×200 = 70,5 [mg (+)katechiny/100ml ekstraktu]

• Rozcieńczenie 500-krotne:

x =
= 0,4873 [mg (+)katechiny/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,4873×500 = 243,65 [mg (+)katechiny/100ml ekstraktu]

• Rozcieńczenie 1000-krotne:

x =
= 0,7077 [mg (+)katechiny/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,7077×1000 = 707,7 [mg (+)katechiny/100ml ekstraktu]

Obliczenia dla ekstraktu z soku jabłkowego:

Ze względu na to, że wartość absorbancji pierwszej próbki nie mieściła się w przedziale wartości absorbancji krzywej wzorcowej, a wartość absorbancji próbki czwartej nie była wiarygodna obliczeń dokonano tylko dla dwóch próbek.

• Rozcieńczenie 5-krotne:

x =
= 0,5113 [mg (+)katechiny/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,5113×5 = 2,5565 [mg (+)katechiny/100ml ekstraktu]

• Rozcieńczenie 10-krotne:

x =
= 0,7809 [mg (+)katechiny/100ml rozcieńczonego ekstraktu]

z uwzględnieniem rozcieńczenia:

0,7077×10 = 7,077 [mg (+)katechiny/100ml ekstraktu]

To sa moje wyniki I obliczenia. W ABTSie mamy tylko po jednej probie soku I herbaty do obliczen wiec jest ok. Natomiast w polifenolach sok wychodzi calkiem podobnie dla rozcienczenia 5x I 10x (rozcienczenie 2x nie miesci sie w krzywej, a 50x wynik absorbancji jest bez sensu I wychodza bzdury, proponuje go pominac w obliczeniach). Nie wiem tylko co zrobic z wynikami polifenoli dla herbaty bo w kazdym rozcienczeniu wychodza inne wartosci. Czekam na propozycje I wszelkie uwagi co do mojego sprawozdania. Wyniki musimy miec wszyscy takie same wiec czekam na gg 7749649 lub mail [e-mail]

---