Uniwersytet Mikołaja Kopernika w Toruniu
Collegium Medicum im. L. Rydygiera w Bydgoszczy
Wydział Lekarski
Biotechnologia
Badanie właściwości
antyoksydacyjnych wybranych
flawonoidów metodą
spektroskopii optycznej.
Praca wykonana pod kierunkiem
dr hab. Stefana Kruszewskiego, prof..
UMK
Katedra Biofizyki, Zakład Fizyki
Medycznej
Toruń 2012
Karolina Jakołcewicz
nr albumu 217507
Wolne rodniki
Wolne rodniki to niestabilne cząsteczki zawierające
niesparowany elektron.
In vivo rodniki powstają w wielu reakcjach i odgrywają
ważną rolę zarówno w fizjologii jak i patofizjologii:
w organizmach ssaków uwalniane są w łańcuchu oddechowym,
podczas utleniania hemoglobiny oraz podczas wybuchów
tlenowych komórek fagocytujących
u roślin mogą powstawać w procesie fotosyntezy
Rodniki mogą pełnić rolę przekaźników sygnału w
komórkach, negatywną stroną ich działania jest udział
w patogenezie
i rozwoju ponad dwustu chorób. Wśród tych chorób
znajdują się tzw. choroby cywilizacyjne takie jak
cukrzyca, choroby układu krążenia i nowotwory.
Flawonoidy
Flawonoidy to interesująca grupa związków
naturalnych, ze względu na szeroki zakres działania
jaki posiadają.
Obecność w ich strukturze chemicznej różnych grup
i ugrupowań sprawia, że wykazują one szeroki
zakres aktywności biologicznej. Dzięki takiej
budowie mogą
w różny sposób oddziaływać na metabolizm
komórkowy.
Głównym powodem dla którego stwierdzono
pozytywny wpływ flawonoidów na organizm
człowieka jest ich aktywność antyoksydacyjna, czyli
zdolność do neutralizacji wolnych rodników.
Kwercetyna
(3,5,7,3´,4´-pentahydroksyflawon)
Kwercetyna, czyli 3,5,7,3´,4´-pentahydroksyflawon jest jednym z
najbardziej rozpowszechnionych związków flawonoidowych.
Składa się z trzech pierścieni i pięciu grup hydroksylowych.
Otrzymana z surowca roślinnego w postaci krystalicznej jest praktycznie
nierozpuszczalna w wodzie.
Ma dobrą wchłanialność z przewodu pokarmowego.
Cel pracy:
1.
Wykazanie właściwości
antyoksydacyjnych wybranego
flawonoidu – kwercetyny
2.
Pokazanie interakcji pomiędzy
kwercetyną a białkiem surowicy
ludzkiej – albuminą
3.
Przebadanie wpływu anionorodnika
ponadtlenkowego na utlenianie HSA
W Y N I K I
Absorbancja kwercetyny w różnych przedziałach czasowych.
Widma przedstawiają ewolucję czasową kwercetyny z formy
nieutlenionej do formy utlenionej. Utlenianie kwercetyny było
wywołane obecnością wolnych rodników generowanych przez
AAPH.
Natężenie fluorescencji fluoresceiny w funkcji czasu w
obecności kwercetyny o różnych stężeniach. Krzywa wzorcowa
(czerwona linia) przedstawia próbkę, która nie zawierała
kwercetyny.
∆P otrzymano poprzez obliczenie różnicy miedzy polem pod
krzywą z antyoksydantem, a polem pod krzywą wzorcową.
Fragmenty widma zależności natężenia fluoryzacji kwercetyny
od stężenia HSA. Widmo ilustrujące próbkę bez HSA (linia
czerwona) wykazuje fluoryzację bliską zeru. Każde z kolejnych
widm zawiera HSA.
Natężenie fluorescencji fluoresceiny w funkcji czasu w
zależności od stężenia HSA i kwercetyny. Przedstawione
zostały pomiary natężenia fluorescencji dla roztworów
kwercetyny i HSA oraz dla roztworów kwercetyny i HSA w
różnym stosunku stężeniowym.
Zależność wartości pola pod wykresem od pojemności
antyutleniającej kwercetyny z HSA. ∆P otrzymano poprzez
obliczenie różnicy między polem pod krzywą z antyoksydantem,
a polem pod krzywą wzorcową. Obliczenia pola były wykonane
dla stężeń kwercetyny i HSA użytych
w badaniu widm emisji fluorescencji z poprzedniego wykresu.
Natężenie fluoryzacji kwercetyny z HSA w funkcji czasu w
zależności od obecności AAPH. Zaobserwować można wyraźną
różnicę w czasie fluoryzacji kwercetyny w momencie
pojawienia się rodników
w porównaniu z czasem fluoryzacji kwercetyny przy braku
rodników.
Absorbancja HSA w różnych przedziałach czasowych w
zależności od stopnia degradacji białka. Fragmenty widma
absorbancji przedstawiają ewolucję czasową HSA wywołaną
utlenianiem białka przez rodniki generowane przez AAPH.
Podsumowanie
Badania przeprowadzone metodą ORAC-FL wykazały
zdolności antyoksydacyjne kwercetyny, a także wykazały,
że są one wprost proporcjonalne do wzrostu jej stężenia.
Pomiar natężenia fluorescencji kwercetyny z HSA wykazał
zdolność do łączenia się tych dwóch cząsteczek.
Pomiar natężenia fluorescencji kwercetyny w połączeniu z
HSA
w obecności wolnych rodników wykazał, że kwercetyna
pomimo połączenia z białkiem wykazuje aktywność
atyoksydacyjną, ale jest ona mniejsza w stosunku do
aktywności jaką wykazuje kwercetyna występująca w
roztworze bez białka.
Reakcja prowadzona metodą opracowaną przez Witko-
Sarsat wykazała szkodliwy wpływ wolnych rodników na
HSA.