AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW 

PRZECIWUTLENIAJĄCYCH

W WYBRANYCH 

MIĘŚNIACH KURCZĄT 

UTRZYMANYCH

W RÓŻNYCH SYSTEMACH

- metodyka badań

Promotor: 

Dyplomant:

Dr inż. Małgorzata Korzeniowska

 Anna 

Włodarczyk

ENZYMY 

PRZECIWUTLENIAJĄCE

• Są to specjalne enzymy 

wykorzystywane do usuwania wolnych 

rodników.

• Należą do nich między innymi:

Dysmutaza ponadtlenkowa
Peroksydaza glutationowa
Katalaza

DYSMUTAZA PONADTLENKOWA 

(SOD)

• Wszystkie znane dysmutazy to 

enzymy katalizujące reakcję 
dysmutacji anionorodnika
ponadtlenkowego do nadtlenku 
wodoru
i tlenu cząsteczkowego

O

2-· 

+ O

2-· 

+ 2H

+

  H

2

O

2 

+ O

2

PEROKSYDAZA GLUTATIONOWA 

(GPX)

• Substratem dla peroksydazy 

glutationowej jest zredukowany 
glutation (GSH), który zostaje 
utleniony do disulfidu glutationu 
(GSSG)

2GSH + H2O2 -> GSSG + 2 H2O

KATALAZA (CAT)

• Katalizuje ona reakcję 

dysproporcjonowania nadtlenku 
wodoru, prowadzących do powstania 
tlenu cząsteczkowego i wody.

H

2

O

2

 + Fe

+3

-CAT -> 2H

2

O + O + Fe

+5

-CAT

H

2

O

2

 + O=Fe

+5

-CAT -> Fe

+3

-CAT + H

2

O + 

O

2

AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW 

PRZECIWUTLENIAJĄCYCH

• Mają na nią wpływ różne czynniki, 

takie jak:

Stężenie enzymu
Stężenie substratu
Inhibitory
Temperatura
pH

• Enzymy przeciwutleniające rozkładają 

reaktywne formy tlenu dzięki czemu 
zapobiegają różnym zmianą wywołanym w 
organizmie przez ten czynnik.

MATERIAŁ BADAWCZY

• Mięśnie udowe kurcząt 

Charakterystyka mięśni udowych:

 mięśnie czerwone (ciemne)
 metabolizm glikolityczno-

oksydatywny
lub wyłącznie tlenowy           

CEL PRACY

• Określenie aktywności enzymów 

przeciwutleniających w mięśniach 
udowych kurcząt.

SCHEMAT DOŚWIADCZENIA

TKANKA 

MIĘŚNIOWA

DYSMUTAZA

PONADTLENKO

WA

KATALAZA

PEROKSYDAZA

GLUTATIONOW

A

HOMOGENIZAC

JA

WIROWANIE

SUPERNATANT

OZNACZENIA

OZNACZENIE DYSMUTAZY 

PONADTLENKOWEJ (SOD)

• Metoda oznaczenia polega na śledzeniu 

szybkości reakcji autooksydacji odczynnika 
R1
katalizowanej przez SOD. Wodny roztwór 
powstałego chromagenu (pH 8,8) absorbuje 
światło widzialne przy λ

max

 =525nm.

Interferencje związków zawierających wolne 
grupy 
-SH są eliminowane przez dodanie 
odczynnika R2 

OZNACZENIE PEROKSYDAZY 

GLUTATIONOWEJ (GPx)

• Metoda polega na dodaniu próby 

supernatantu do roztworu zawierającego 
glutation (GSH), reduktazę glutationową 
(GR)
i NADPH. Początek reakcji enzymatycznej 
jest w momencie dodania wodorotlenku
tert-butylu i rejestruje się zmiany 
absorbancji
przy λ

max

 =340nm w czasie 3 minut.

OZNACZENIE KATALAZY

• Do oznaczenia pobierano 25 ηl próby 

supernatantu, 975 ηl buforu 
fostoranowego oraz 500 ηl 10mM 
H

2

O

2 

lub do próby ślepej bufotu 

fosfotanowego.
Następnie mierzono absorbancję przy
λ

max

 =240nm od razu po dodaniu 

nadtlenku i następnie po minucie

OZNACZENIA:

• Oznaczenia wykonujemy w 2 
powtórzeniach
przy odpowiednich rozcieńczeniach i 
próbę ślepą która jest wykonywana 
bez dodatku enzymu.

DZIĘKUJĘ ZA 

UWAGĘ 

Literatura: