AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW 

PRZECIWUTLENIAJĄCYCH

W WYBRANYCH 

MIĘŚNIACH KURCZĄT 

UTRZYMANYCH

W RÓŻNYCH SYSTEMACH

- metodyka badań

Promotor: 

Dyplomant:

Dr inż. Małgorzata Korzeniowska

 Anna 

Włodarczyk

ENZYMY 

PRZECIWUTLENIAJĄCE

• Są to specjalne enzymy 

wykorzystywane do usuwania wolnych 

rodników.

• Należą do nich między innymi:

Dysmutaza ponadtlenkowa
Peroksydaza glutationowa
Katalaza

DYSMUTAZA PONADTLENKOWA 

(SOD)

• Wszystkie znane dysmutazy to 

enzymy katalizujące reakcję 
dysmutacji anionorodnika
ponadtlenkowego do nadtlenku 
wodoru
i tlenu cząsteczkowego

O

2-· 

+ O

2-· 

+ 2H

+

  H

2

O

2 

+ O

2

PEROKSYDAZA GLUTATIONOWA 

(GPX)

• Substratem dla peroksydazy 

glutationowej jest zredukowany 
glutation (GSH), który zostaje 
utleniony do disulfidu glutationu 
(GSSG)

2GSH + H2O2 -> GSSG + 2 H2O

KATALAZA (CAT)

• Katalizuje ona reakcję 

dysproporcjonowania nadtlenku 
wodoru, prowadzących do powstania 
tlenu cząsteczkowego i wody.

H

2

O

2

 + Fe

+3

-CAT -> 2H

2

O + O + Fe

+5

-CAT

H

2

O

2

 + O=Fe

+5

-CAT-> Fe

+3

-CAT + H

2

O + 

O

2

AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW 

PRZECIWUTLENIAJĄCYCH

• Mają na nią wpływ różne czynniki, 

takie jak:

Stężenie enzymu
Stężenie substratu
Inhibitory
Temperatura
pH

• Enzymy przeciwutleniające rozkładają 

reaktywne formy tlenu dzięki czemu 
zapobiegają różnym zmianą wywołanym w 
organizmie przez ten czynnik.

MATERIAŁ BADAWCZY

• Mięśnie udowe kurcząt 

Charakterystyka mięśni udowych:

 mięśnie czerwone (ciemne)
 metabolizm glikolityczno-

oksydatywny
lub wyłącznie tlenowy           

CEL PRACY

• Określenie aktywności enzymów 

przeciwutleniających w mięśniach 
udowych kurcząt.

SCHEMAT DOŚWIADCZENIA

TKANKA 

MIĘŚNIOWA

DYSMUTAZA

PONADTLENKOWA

KATALAZA

PEROKSYDAZA

GLUTATIONOWA

HOMOGENIZACJA

WIROWANIE

SUPERNATANT

OZNACZENIA

OZNACZENIE DYSMUTAZY 

PONADTLENKOWEJ (SOD)

• Aktywność enzymu oznaczono metodą 

spektrofotometryczną korzystając z 
gotowych testów firmy Cayman.

•  Doświadczenie jest oparte na śledzeniu 

zmian absorbancji przy 525nm w 
obecności lub nieobecności badanej próby 
po dodaniu odczynnika R1 w celu 
określenia maksymalnego przyrostu 
absorbancji na jednostkę czasu.

REAKCJA ENZYMATYCZNA SOD

• Metoda jest 

oparta na 
śledzeniu 
szybkości 
reakcji 
autooksydacj
i odczynnika 
R1 
katalizowane
j przez SOD

OZNACZENIE PEROKSYDAZY 

GLUTATIONOWEJ (GPx)

• Aktywność enzymu oznaczono metodą 

spektrofotometryczną korzystając z gotowych 
testów firmy Cayman.

• Oznaczenie aktywności c-GPx polega na 

dodaniu badanej próby do roztworu 
zawierającego glutation (GSH), reduktazę 
glutationową (GR) i NADPH.

• Początek reakcji jest po dodaniu wodorotlenku 

tert-butylu i rejestruje się zmiany absorbancji
w czasie 3 minut.

REAKCJA ENZYMATYCZNA GPx

• Metoda oparta jest na 

wykorzystywaniu następujących , 

sprzężonych ze sobą następujących 

reakcji:

• Utlenianie NADPH do NADP

+ 

powoduje 

spadek absorbancji przy długości fali 

340nm, co pozwala na oznaczenie 

aktywności GPx

OZNACZENIE KATALAZY (CAT)

• Aktywność enzymu oznaczono metodą 

spektrofotometryczną korzystając z 
gotowych testów firmy Cayman.

• Katalaza jest enzymem biorącym udział w 

rozkładzie nadtlenku wodoru zgodnie z 
reakcją:

REAKCJA ENZYMATYCZNA CAT

• Reakcję prowadzono w środowisku 

buforu fosforanowego w 
temperaturze 30

o

C

• Rozkład nadtlenku mierzono poprzez 

spadek ekstynkcji przy długości fali 
240nm w którym zakresie H

2

O

2

 

absorbuje promieniowanie 
ultrafioletowe.

OZNACZENIA:

• Oznaczenia wykonujemy w 2 
powtórzeniach
przy odpowiednich rozcięczeniach i 
próbę ślepą która jest wykonywana 
bez dodatku enzymu.

DZIĘKUJĘ ZA 

UWAGĘ 

Literatura:

1. Bartosz G. 2009. Druga twarz tlenu. 

Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa.

2. Kleczkowski M., Kluciński W., Sitarska E., Sikora J. 

1998. Stres oksydacyjny i wybrane wskaźniki 
stanu antyoksydacyjnego zwierząt. Medycyna
Weterynaryjna: 166 – 171.

3. Kopeć W. 2009. Przetwórstwo mięsa drobiu – 

podstawy biologiczne i technologiczne: 91-94

4. www.sfd.pl/Enzymy_-

_krótka_charakterystyka_i_klasyfikacja-
t417421.html

5. pml.strefa.pl/ePUBLI/147/14.pdf – Enzymy 

antyoksydacyjne bydowa, właściwośi, funkcje