biochemia III, Czynniki warunkujące aktywność enzymów


Czynniki warunkujące aktywność enzymów

Cel ćwiczenia:

Celem ćwiczenia jest poznanie wpływu takich podstawowych czynników jak temperatura, stężenie jonów wodorowych oraz stężenie enzymu na aktywność enzymów.

Odczynniki:

  1. roztwór enzymu (wyciąg z kiełków pszenicy)

  2. bufor o pH = 3,0

  3. bufor o pH = 4,4

  4. bufor o pH = 5,2

  5. bufor o pH = 6,6

  6. 0,00075-molowy 4-nitrofenylofosforanu

  7. roztwór NaCO3

Szkło i inne pomoce:

- 1 zlewka na 600 ml

- 1 pipeta serologiczna na 1 i 5 ml oraz

- 14 probówek chemicznych.

Wykonanie:

Próba zerowa:

Do probówki wlano 1,25 ml H2O, dodano to tego 0,5 bufora o pH= 5,2 i umieszczono na pięć minut w łaźni wodnej o temp. 38˚C. Następnie roztwór wyjęto i dodano 0,5 ml 4-nitrofenylofosforanu, wymieszano i inkubowano przez 10 min w temp. 38˚C . Po upływie wyznaczonego czasu dodano 2,5ml NaCO3.

Wpływ temperatur:

Przygotowanie:

Do trzech probówek odmierzono po 0,5 ml roztworu enzymu , następnie 0,5 ml wody i 0,75 ml buforu o pH = 5,2 . Pierwszą próbówkę umieszczono w temp. 0˚C (woda z lodem), drugą w łaźni wodnej o temp. 38˚C, a trzecią w łaźni wodnej temp. 100˚C na około 5 minut. Następnie probówki wyjęto i dodano 0,5 ml 4-nitrofenylofosforanu, wymieszano i inkubowano przez 10 min w temp. 38˚C . Po upływie wyznaczonego czasu dodano 2,5ml NaCO3.

Pomiar i wykres:

Po ustawieniu fotometru na próbę zerową i długość fali równą 420 nm uzyskano wyniki dla poszczególnych roztworów z probówek, następnie przedstawiono je w tabelce i sporządzono wykres zależności wpływu temperatury od absorpcji

Tabela wyników wpływu temperatury:

temperatura

0˚C

38˚C

100˚C

wynik

0,012

0,233

0,023

0x01 graphic

Wpływ stężenia enzymu:

Przygotowanie:

o pięciu probówek odmierzono kolejno po 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 ml roztworu enzymu i odpowiednio po 1,0; 0,75; 0,5; 0,25 ml H2O (do probówki z 1,25 ml enzymu nie dodano wody). umieszczono na pięć minut w łaźni wodnej o temp. 38˚C do każdej probówki po 0,5 ml buforu o pH = 5,2. Tak przygotowane roztwory umieszczono na pięć minut w łaźni wodnej o temp. 38˚C. Po upływie wyznaczonego czasu dodano probówki wyjęto i dodano 0,5 ml 4-nitrofenylofosforanu, wymieszano i inkubowano przez 10 min w temp. 38˚C. Następnie dodano 2,5ml NaCO3 do każdej.

Pomiar i wykres:

Po ustawieniu fotometru na próbę zerową i długość fali równą 420 nm uzyskano wyniki dla poszczególnych roztworów z probówek, następnie przedstawiono je w tabelce i sporządzono wykres zależności wpływu stężenia enzymu od absorpcji

Tabela wyników wpływu stężenia enzymu

stężenia enzymu

0,25 ml

0,5 ml

0,75 ml

1,0 ml

1,25 ml

wynik

0,187

0,315

0,316

0,571

0,765

0x08 graphic

Wpływ stężenia jonów wodorowych (pH):

Przygotowanie:

Do czterech probówek odmierzono po 0,5 ml roztworu enzymu, następnie 0,5 ml wody i odpowiednio po 0,75 ml buforu o pH = 3,0; 4,4; 5,2; 6,6. Tak przygotowane roztwory umieszczono na pięć minut w łaźni wodnej o temp. 38˚C. Po upływie wyznaczonego czasu dodano probówki wyjęto i dodano 0,5 ml 4-nitrofenylofosforanu, wymieszano i inkubowano przez 10 min w temp. 38˚C. Następnie dodano 2,5ml NaCO3 do każdej.

Pomiar i wykres:

Po ustawieniu fotometru na próbę zerową i długość fali równą 420 nm uzyskano wyniki dla poszczególnych roztworów z probówek, następnie przedstawiono je w tabelce i sporządzono wykres zależności wpływu stężenia pH od absorpcji

Tabela wyników wpływu pH

pH

3,0

4,4

5,2

6,6

wynik

0,053

0,189

0,288

0,167

0x01 graphic

Schemat rozcieńczeń

0x08 graphic

Obliczanie aktywności enzymu:

  1. w temperaturze 38˚C

0x01 graphic
A- Absorpcja

0,002 - molowy współczynnik 4-nitrofenylofosforanu

139 - masa molowa produkt

0x08 graphic
0x01 graphic
0x01 graphic

  1. o stężeniu równym 0,5 mola

0x01 graphic
A- Absorpcja

0,002 - molowy współczynnik 4-nitrofenylofosforanu

139 - masa molowa produkt


0x08 graphic

0x01 graphic

  1. o pH = 5,2

0x01 graphic
A- Absorpcja

0,002 - molowy współczynnik 4-nitrofenylofosforanu

139 - masa molowa produkt

0x08 graphic


0x08 graphic

Wnioski:

W zależności od temperatury, stężenia enzymu czy też pH roztworu, absorpcja fali jest większa bądź mniejsza. Największą wartość osiąga w optymalnych warunkach, to jest w temperaturze 38˚C i w środowisku o pH = 5,2. Zwiększone stężenie roztworu nie powoduje spadku absorpcji, jak to jest w przypadku poprzednich czynników.

0x01 graphic

0x01 graphic

0x01 graphic

0x01 graphic

0x01 graphic

0x01 graphic



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
biochemia III;], Czynniki warunkujące aktywność enzymów
(), biochemia L, Wpływ temperatury na aktywność enzymów (ćw E)
Lab06 Aktywnosc enzymow I, Lekarski WLK SUM, lekarski, biochemia, enzymy
Ocena aktywności enzymów jako wskaźnik uszkodzenia narządów, MEDYCYNA, Biochemia
Czynniki wpływającego na aktywność enzymów
Czynniki wpływające na aktywność enzymów
Czynniki warunkujące zdrowie
Czynniki warunkuj ce wybor metod nauczenia odpowiednich dla
AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW PRZECIWUTLENIAJĄCYCH!
Czynniki warunkujące wystąpienie i czas trwania częściowej remisji u chorych na cukrzycę typu 1
Biochemia III, Notatki AWF, Biochemia, BIOCHEMIA - na koło
9) Oznaczanie aktywności enzymów amylolitycznych
Oznaczanie aktywności enzymów lipolitycznych
10 CZYNNIKI WARUNKUJĄCE AKCJĘ PORODOWĄ

więcej podobnych podstron