ĆWICZENIE 3

REAKCJE CHARAKTERYSTYCZNE
AMINOKWASÓW I BIAŁEK

Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z charakterystycznymi reakcjami aminokwasów i białek przy zastosowaniu jako materiału ćwiczeniowego czystych roztworów tych związków. Reakcje te umożliwiają odróżnianie aminokwasów i białek od innych związków organicznych, białek od wolnych aminokwasów, wykrycie aminokwasów zawierających atomy siarki oraz aminokwasów aromatycznych. Należy także dokonać identyfikacji otrzymanej próbki aminokwasu.

Sprzęt i odczynniki:

statyw z probówkami, pipety

1% r-ry aminokwasów: alanina, leucyna, cystyna, tyrozyna, tryptofan, wodny r-r białka, alkohol etylowy, nieznany aminokwas

0,1% acetonowy r-r ninhydryny,

0,5% r-r siarczanu miedziowego,

6n NaOH, stęż. kwas azotowy,

stęż. kwas siarkowy,

odczynnik Millona,

2% r-r octanu ołowiawego

Wykonanie ćwiczenia:

Dla wymienionych powyżej roztworów aminokwasów i białka wykonać szereg reakcji charakterystycznych wg schematu zamieszczonego poniżej. Wyniki zamieścić w tabelach:

REAKCJA	ZWIĄZEK	WYNIK	WNIOSEK
Próba ninhydrynowa	zw. organiczny alanina leucyna cystyna cysteina tryptofan tyrozyna białko nieznana próbka
Próba biuretowa
Próba ksantoproteinowa
Próba Millona
Próba z octanem ołowiu

WYNIKI DOŚWIADCZEŃ Z BADANĄ PRÓBKĄ:

PRÓBA	WYNIK	WNIOSEK
Próba ninhydrynowa
Próba biuretowa
Próba ksantoproteinowa
Próba Millona
Próba z octanem ołowiu
Nieznanym aminokwasem jest

PRÓBA NINHYDRYNOWA - odróżnianie aminokwasów i białek od innych związków organicznych

Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych roztworów, dodać po 1 ml r-r ninhydryny i ogrzewać przez 3 min w łaźni wodnej. Powinno pojawić się fioletowe zabarwienie (aminokwas) lub niebieskie (białko).

PRÓBA BIURETOWA - odróżnianie białek od wolnych aminokwasów

Do probówek wprowadzić po 1 ml badanych roztworów dodać po 2 ml 6n NaOH oraz po 1 kropli 0,5 % r-ru siarczanu miedzi dobrze wymieszać i dodać jeszcze raz 0,5 ml r-ru miedzi. W obecności białka pojawia się fioletowe zabarwienie, a aminokwasy dają barwę jasnoniebieską.

PRÓBA KSANTOPROTEINOWA - wykrywanie aminokwasów aromatycznych

Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych r-rów, dodać po 1 ml stęż kwasu azotowego i ogrzewać na łaźni wodnej przez 5 min. Po ochłodzeniu dodać małymi porcjami, ciągle mieszając 3 ml 6n NaOH. W obecności aminokwasu aromatycznego pojawia się czerwone zabarwienie.

PRÓBA MILLONA - wykrywanie tyrozyny

Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych r-rów, dodać 4 krople odczynnika Miliona i ogrzewać ostrożnie do wrzenia nad płomieniem palnika. W obecności tyrozyny powinno pojawić się ceglastoczerwone zabarwienie.

WYKRYWANIE AMINOKWASÓW ZAWIERAJĄCYCH SIARKĘ (próba z octanem ołowiu)

Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych r-rów, dodać po 2 ml 6n NaOH oraz 1,0 ml r-ru octanu ołowiu i ogrzewać przez 5 min w łaźni wodnej. W obecności aminokwasu zawierającego siarkę pojawi się brunatno czarny osad lub szare zmętnienie.