BADANIE WPŁYWU OBECNOSCI DETERGENTU NA AKTYWNOŚĆ WYBRANYCH
ENZYMÓW TRAWIENNYCH
1. Badanie wpływu detergentu na działanie lipaz
Lipazy trawią tłuszcze uwalniając kwasy tłuszczowe, które oznacza się za pomocą
miareczkowania roztworem NaOH.
Do dwóch kolbek stożkowych odmierzyć 10 cm
3
oleju, 1cm
3
wody destylowanej (próba
ślepa) lub 1 cm
3
roztworu detergentu o odpowiednim stężeniu (1, 0.1, 0.01, 0.001%) oraz
1cm
3
enzymu (100 mg pankreatyny rozpuścić 100 ml buforu o pH = 7,4). Wstrząsnąć aż do
otrzymania emulsji.
Pierwszą kolbę wstawić do termostatu o temp. 37
o
C. Do drugiej kolby dodać 40 cm
3
alkoholu, 2 krople fenoloftaleiny i miareczkować 0,1 M NaOH do różowego zabarwienia.
Do kolby po inkubacji dodać również 40 cm
3
alkoholu i miareczkować zawartość wobec
fenoloftaleiny roztworem NaOH.
Od wyniku drugiego miareczkowania (próby inkubowanej) odjąć wynik miareczkowania
próby ślepej (nie inkubowanej). Siłę lipolityczną enzymu wyrazić liczbą cm
3
NaOH na 1 cm
3
enzymu.
Uzyskane wyniki przedstawić na papierze milimetrowym w postaci wykresu zależności
aktywności badanego enzymu od stężenia dodanego detergentu.
2. Badanie wpływu detergentu na aktywność enzymów amylolitycznych
Do probówki odmierzyć 5 cm
3
1% roztworu skrobi, 2 cm
3
1% roztworu NaCl, 1 cm
3
wody destylowanej (próba ślepa) lub 1 cm
3
roztworu detergentu o odpowiednim stężeniu (1,
0.1, 0.01, 0.001%) oraz 2cm
3
buforu o pH = 6,8.
Probówkę wstawić na 5 min. do łaźni wodnej o temp. 37
o
C. Następnie dodać 1 cm
3
roztworu enzymu (przygotowanego w ćwiczeniu 1). Zamieszać, wstawić do łaźni wodnej
(37
o
C) i zanotować czas. Dokładnie w odstępach 1 minutowych pobierać 2 krople
inkubowanej mieszaniny i dodawać 3 krople płynu Lugola (J w KJ) i kroplę rozcieńczonego
HCl.
Barwa niebieska z jodem wskazuje na obecność niestrawionej skrobi. Jeśli trawienie
jest w toku, powstaje barwa czerwono-fioletowa. Brak zmiany w barwie świadczy o
rozłożeniu całej skrobi do niskich dekstryn. Jest to punkt achromowy.
