Plasmid Mini 

zestaw do izolacji ultraczystego plazmidowego DNA 

Protokół 

numery katalogowe 020-50, 020-250 

01 

Zestaw przeznaczony jest do izolacji plazmidowego DNA z 1.5 - 3 ml hodowli bakteryjnej

Wst´p

Zestaw opiera si∏ na zdolnoÊci wiàzania si∏ DNA do złó× krzemionkowych w wysokich 

st

ę×eniach soli chaotropowych.W pierwszym etapie bakterie poddawane sà lizie 

alkalicznej, a nast∏pnie lizat zoboj∏tniany jest buforem GL3. Bufor ten powoduje 

precypitację chromosomalnego DNA i białek, pozostawiajàc jednoczeÊnie plazmidowe 

DNA w roztworze. Po odwirowaniu próbki, supernatant zawierajàcy plazmidowe 

DNA nanoszony jest na minikolumn∏ ze specjalnym zło×em krzemionkowym. DNA 

przechodzàc przez zło×e osiada na nim, podczs gdy zanieczyszczenia przechodzà nie 

wià×àc si∏. Po wypłukaniu z kolumny resztek zanieczyszczeƒ, oczyszczone plazmidowe 

DNA wymywane jest z niej buforem TE lub wodà i nadaje si∏ do bezpoÊredniego 

wykorzystania bez koniecznoÊci precypitacji. DNA uzyskane przy u×yciu tego zestawu 

doskonale nadaje si∏ do wszelkich metod stosowanych w biologii molekularnej, w tym do 

automatycznego sekwencjonowania. 

Uwagi

1.  PojemnoÊć minikolumny do oczyszczania DNA wynosi 20 μg

2.  SDS znajdujàcy si∏ w roztworze L2 precypituje w niskich temperaturach, dlatego 

gdy roztwór nie jest klarowny nale×y go ogrzać w temperaturze 40°C do uzyskania 

całkowitej klarownoÊci.

Protokó∏ izolacji

1.  Osad z 1.5 - 3 ml nocnej hodowli bakterii dokładnie zawiesić przez pipetowanie lub 

worteksowanie w 200 μl roztworu do zawieszania L1.

2.  Dodać 200 μl alkalicznego roztworu lizujàcego L2 i po wymieszaniu przez kilkukrotne 

odwracanie probówki pozostawić 3 min. w temperturze pokojowej.

Uwaga!

 Po dodaniu roztworu L2 nale×y ostro×nie mieszać zawartoÊć probówki aby nie spowodować 

fragmentacji chromosomalnego DNA. Zwykle wystarczy 5 - 6-cio krotne odwrócenie probówki. Po 3 

minutach inkubacji lizat powinien być całkowicie klarowny. Je×eli nie jest nale×y odwrócić lizat kilka 

razy i przedłu×yć czas inkubacji o dalsze 3 minuty.

3.  Dodać 400 μl roztworu zoboj∏tniajàcego GL3 i wymieszać przez kilkukrotne 

odwracanie probówki.

4.  Wirować 10 minut przy 10 - 15 tys. RPM.
5.  Ostro×nie wlać supernatant do minikolumny do oczyszczania plazmidowego DNA.
6.  Wirować 1 minut∏ przy 10 - 15 tys. RPM.
7.  Wyciàgnàć minikolumn∏ z probówki, wylać przesàcz i ponownie wło×yć jà do 

probówki.

A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia, Poland
tel +48577351194, fax +48586228578, www.aabiot.com, info@aabiot.com

Protokół

02

8.  Dodać do kolumny 500 μl pierwszego roztworu płuczàcego W.
9.  Wirować 1 minut∏ przy 10-15 tys. RPM.
10.  Wyciàgnàć minikolumn∏ z probówki, wylać przesàcz i ponownie wło×yć kolumn∏ 

do probówki.

11.  Dodać do kolumny 600 μl drugiego roztworu płuczàcego A1.
12.  Wirować 2 minuty przy 10-15 tys. RPM.
13.  Osuszonà minikolumn∏ umieÊcić w nowej probówce 1.5 ml i do zło×a znajdujàcego 

si∏ na dnie kolumny dodać 60 μl roztworu TE lub wody.

14.  Próbk∏ inkubować 3 minuty w temperaturze pokojowej.
15.  Wirować 1 minut∏ przy 10-12 tys. RPM.
16.  Kolumn∏ usunàć a oczyszczone plazmidowe DNA znajdujàce si∏ w probówce 

przetrzymywać w lodówce do czasu dalszych analiz.

A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia, Poland
tel +48587351194, fax +48586228578, www.aabiot.com, info@aabiot.com