Chromatografia cienkowarstwowa (TLC)
Przygotowanie zestawu do analizy:
W zlewce o pojemności 150 cm3 należy umieścić 10-12 cm3 mieszaniny rozpuszczalników. Skład roztworu należy uzgodnić z prowadzącym. Poszczególne rozpuszczalniki należy odmierzać cylindrem miarowym o pojemności 10 cm3, stosując osobny cylinder do każdego rozpuszczalnika. W zlewce z roztworem umieścić zwinięty kawałek bibuły, tak aby osłaniał ścianki naczynia (zlewki). Całość należy przykryć szkiełkiem zegarkowym. Rozwijanie chromatogramu może być wykonane po nasyceniu całej bibuły roztworem.
Z arkusza folii aluminiowej pokrytej złożem krzemionkowym (silikażelem) należy wyciąć dwie płytki o wymiarach 20×80 mm, uważając, aby nie uszkodzić fazy stacjonarnej. W odległości 15 mm od krótszej krawędzi płytki narysować ołówkiem linię startową.
Przygotowanie próbki do analizy:
Badaną próbkę (jedna próbka na dwie grupy!) umieścić w moździerzu, dodać ok. 1 cm3 acetonu i utrzeć (zmiażdżyć), aż do uzyskania intensywnie zabarwionego ekstraktu. Za pomocą kapilary szklanej pobrać ekstrakt i nanieść na płytkę chromatograficzną. Nanosić należy na narysowanej linii startowej, dotykając krótko powierzchni płytki. Aby uniknąć nadmiernego powiększania plamki, pomiędzy kolejnymi dotknięciami płytki należy poczekać na jej wyschnięcie (ew. można podmuchać). Naniesiona plamka (cała zawartość kapilary) nie powinna mieć średnicy większej niż 5 mm.
Wykonanie analizy:
Przygotowaną płytkę z naniesioną próbką należy wstawić delikatnie do naczynia (zlewki) z roztworem rozwijającym, tak aby nie zachlapać płytki, i natychmiast przykryć z powrotem szkiełkiem zegarkowym. Gdy front przesuwającego się w górę płytki rozpuszczalnika dojdzie do szczytu płytki, należy wyjąć płytkę z naczynia i pozostawić do wyschnięcia. Płytkę należy opisać na dole, podając skład roztworu (np. T:A 1:2) i grupę (np. 2c). Zanotować wynik analizy i oddać płytkę do zeskanowania. W przypadku zabrania płytki do samodzielnego skanowania należy ją zapakować, szczelnie osłaniając od światła.
stosowane skróty:
Ch - cykloheksan, T - toluen, OE - octan etylu, A - aceton, E - etanol
Instrukcja ćwiczenia