METODA SAUTHERNA1, psychologia, Genetyka


METODA SAUTHERNA

DNA tnie się przy zastosowaniu enzymów restrykcyjnych na fragmenty, które następnie rozdziela się pod względem wielkości poprzez elektroforezę w żelu. Fragmenty te przenosi się następnie na filtr wiążący DNA , a fragmenty komplementarne identyfikuje się za pomocą autoradiografii, stosując wyznakowane, radioaktywne sondy.

Za pomocą analizy Sautherna możemy wykazać mutacje odcinkowe

-o delecji będzie świadczyć zmniejszenie się rozmiarów lub brak prążków

-o amplifikacji -powstanie prążków o zmniejszonych rozmiarach.

PCR (polymerase chain reaction)

Umożliwia powielanie wybranego fragmentu DNA w milionach kopii, bez użycia wektorów i bakterii. Polega na ok.30 powtarzających się cyklicznych etapach.

Etapy:

-denaturacja dna w temp 90-95 C

-wiązanie starterów temp.50-65 C

- wydłużanie starterów temp 68-72 C

(synteza powielanego fragm.DNA)

Każdy cykl ma ok.3 min, a powstające amplikony służą jako matryce w następnych cyklach reakcji

Prowadząc do logarytmicznego przyrostu ilości produktów. Reakcja PCR zachodzi w termoblokach zdolnych do szybkich zmian temp. La poszczególnych etapów reakcji(4C\sek.)

Mieszanina reakcji PCR;

1.matryca DNA lub cDNA

2. Dwa startery -fragm. Jednoniciowych DNA o dł. kilkunastu nukleotydów komplementarnych do matrycy i ograniczające długości powielanego odcinka DNA.

3.dNTP-miesznina dATP,dCTP,dGTP,dTTP,

4.Termostabilna polimeraza DNA(np. polimeraza Taq)

5. kationy magnezu

6.odpowiedni bufor

Cel:

-Wykrywanie mutacji genowych.

-wykrywanie chorób genetycznych

-wykrywanie nowotworów

-wykrywanie polimorficznych sekwencji(identyfikacja osobnicza)

-monitorowanie chorób(białaczki)

-monitorowanie translokacji.

ANALIZA NORTHERN BLOT

(dotyczy RNA)

Etapy;

-elektroforeza preparatów RNA

-transfer na filtr nylonowy

-związanie RNA z filtrem

-hybrydyzacja

-płukanie filtru

-autoradiografia



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
METODA SAUTHERNA, psychologia, Genetyka
METODA SANGERA, psychologia, Genetyka
METODA SANGERA, psychologia, Genetyka
Przykladowe pytania, WSFiZ- Psychologia, Genetyka zachowania
wklad czynnika i metoda, Studia, Psychologia, SWPS, 2 rok, Semestr 04 (lato), Psychologia Różnic Ind
nowotwory dla studentów, psychologia, Genetyka
SLOWNIK NEURO dodatkowo, WSFiZ- Psychologia, Genetyka zachowania
Trening Zastępowanai agresji - metoda ART-u, PSYCHOLOGIA, Pedagogika, Studia - Pedagogika
wykład 04- 20[1].03.06, psychologia, Genetyka
Metoda Tomatisa, Psychologia, Muzykoterapia, Metoda Tomatisa, Metoda
seminarki, psychologia, Genetyka
Grupy krwi, psychologia, Genetyka
genetyka-wyklad4, psychologia, Genetyka
genetyka-wyklad1, psychologia, Genetyka
metoda wywiadu w psychologii S Zakowicz II
SEM PON RANO Dysmorfologia, psychologia, Genetyka
Metody MIX, psychologia, Genetyka
47XXY, psychologia, Genetyka

więcej podobnych podstron