liczenie komorek w komorze brkera lab all com

LICZENIE KOMÓREK W KOMORZE
BÜRKERA

2011-04-21 08:03:00

Założenia:

Określenie ilości komórek w danej objętości medium lub płynów fizjologicznych jest niezbędne w
późniejszych eksperymentach.

Opis procedury:

1. Oddzielić komórki od dna naczyń hodowlanych przy pomocy trypsyny z EDTA, tzn.

„strypsynować komórki”.

2. Dodać do zawiesiny komórek medium z surowicą, bardzo dokładnie wymieszać komórki.
3. Sterylną pipetą pasteurowską lub pipetą automatyczną (sterylnym żółtym tipsem) nałożyć

zawiesinę komórek do komory Bürkera (tzn. wpuścić komórki pod szkiełko nakrywowe).

4. Liczyć komórki w komorze w następujący sposób:

- liczyć komórki w 9 dużych kwadratach (ograniczonych potrójną linią, składających się z 16 małych
kwadratów każdy ograniczonych podwójną linią),

- z otrzymanych 9 zliczeń wyciągnąć średnią,

- w przypadku, gdy komórki są nierównomiernie rozłożone w dużych kwadratach i pozlepiane
między sobą, należy komórki porządnie wymieszać i liczyć je jeszcze raz,

- zaczynać liczenie od lewego, górnego kwadratu

Objętość komory Bürkera wynosi 0,0001 cm

(0,0001 ml)

Ilość komórek w 1 ml wynosi więc: 10.000 x średnia ilość komórek

Ilość komórek w badanej objętości: ilość ml zawiesiny komórek x 10.000 x średnia ilość komórek.

- komory Bürkera należy po każdym użyciu dokładnie wymyć wodą z detergentem, dobrze
wypłukać wodą bieżącą, 2-3 krotnie wodą destylowaną i dobrze wytrzeć szmatką lub
„kim-wipesem”, szkiełka nakrywowe należy dobrze wymyć wodą z detergentem, dobrze wypłukać
wodą bieżącą, 2-3 krotnie wodą destylowaną, następnie wypłukać w 70% alkoholu etylowym i
dobrze wytrzeć szmatką lub „kim-wipesem”. Szkiełka nakrywowe nakłada się na mokro na komorę
Bürkera. Należy zwrócić uwagę by w miejscu łączenia szkiełek na mokro pojawiły się pierścienie
Newtona.