Część praktyczna

1. Morfologia kolonii drobnoustrojów.

Obejrzyj kolonie różnych drobnoustrojów na podłożach stałych (posiew redukcyjny) i porównaj ze sobą, a następnie wyniki obserwacji zapisz w Tab.1, uwzględniając następujące cechy: wielkość kolonii (średnica w mm), kształt i wzniesienie nad powierzchnię, powierzchnia kolonii, jej brzeg, przejrzystość i barwa oraz zapach. Wpisz także wyniki badań mikroskopowych z poprzedniego ćwiczenia.

Tab.1.

Drobnoustrój	Morfologia kolonii					Morfo- logia komórki*
		Wielkość w mm	Kształt, wzniesienie, brzeg	Powierzchnia	Przejrzystość, barwa		Zapach
S. aureus
M. luteus
E. coli
P. aeruginosa
B. subtilis
C. albicans

* kształt, ułożenie w preparacie, zabarwienie w metodzie Grama

opis kolonii (przykłady):

kształt : okrągła, okrągła z pomarszczonym brzegiem, okrągła z wałem brzeżnym, nieregularna

wzniesienie: płaskie, wypukłe, pępkowate, kraterowate, wypukłe z powierzchnią brodawkowatą

brzeg: gładki, falisty, ząbkowany, kosmkowaty

powierzchnia: gładka (S), szorstka (R), matowa, błyszcząca, pomarszczona, brodawkowata

przejrzystość: przejrzysta, mętna nieprzejrzysta

zabarwienie samej kolonii i zabarwienie wokół kolonii: biała, żółta, pomarańczowa, czerwona, niebieska, zielona, brązowa

zapach: kwaśny, gnilny, miodu, drożdży, mydlany, brak zapachu

Zwróć także uwagę na charakterystyczne cechy kolonii wybranych pałeczek z rodziny Enterobacteriaceae wymienionych w Tab.2.

Tab.2

Drobnoustrój	Morfologia kolonii	Uwagi
Proteus mirabilis	Wzrost mgławicowy (zdolność aktywnego ruchu na podłożu stałym)	Pałeczki Gram (-), silnie urzęsione peritrychalnie
Serratia marcescens	Kolonie czerwone (barwnik prodigiozyna)	Pałeczki Gram (-), drobne, urzęsione peritrychalnie
Klebsiella pneumoniae	Kolonie śluzowe	Pałeczki Gram (-), krótkie, nieurzęsione, tworzą otoczki widoczne w metodzie barwienia pozytywno-negatywnej

2. Typy wzrostu różnych gatunków drobnoustrojów w podłożach płynnych

Obejrzyj hodowle bulionowe wybranych drobnoustrojów i obserwacje zapisz w tabeli 3:

Tab.3

Drobnoustrój	Opis
S.aureus
M.luteus
E.coli
P.aeruginosa
B.subtilis
C.albicans

wpisz typ wzrostu i umiejscowienie w podłożu (górna, dolna część słupa pożywki)

3. Wpływ natlenienia na wzrost bakterii; zdolność rozkładania H₂0₂

Obejrzyj typ wzrostu bakterii beztlenowych z gatunku Clostridium sporogenes w podłożach płynnych i zanotuj uwagi w tabeli 4:

Tab.4

Podłoże	Opis
TSB
Wrzoska*
Tioglikolanowe**

*zawiera kawałki wątroby (adsorpcja tlenu)

**zawiera substancje obniżające potencjał oksydoredukcyjny: L-cystynę i tioglikolan sodowy

Wyjmij płytki z posiewami z anaerostatu , obejrzyj wzrost bakterii i wykonaj test na obecność katalazy; zanotuj uwagi w tabeli 5:

Tab.5

Bakterie	Warunki tlenowe		Warunki beztlenowe
	wzrost*	katalaza**	wzrost*	katalaza**
Micrococcus luteus
Bacillus subtilis
Pseudomonas aeruginosa
Clostridium sporogenes

* „+ „ - wzrost „-” - brak wzrostu

** nanieść kilka kropli wody utlenionej na kolonie bakterii. Pienienie się wody utlenionej oznacza jej rozkład pod wpływem katalazy, enzymu produkowanego przez większość bakterii tlenowych i względnie beztlenowych.

4. Wpływ temperatury na wzrost drobnoustrojów

Zaobserwuj wzrost drobnoustrojów w różnych temperaturach, obserwacje wpisz do tabeli.

Tabela 6.

Drobnoustrój	Temperatura
		4 ^OC	37^OC	55^OC
L.monocytogenes
S. aureus
B.subtilis
G.stearothermophilus

“+”-wzrost, “-“-brak wzrostu

5.

Tab.7

Drobnoustrój	Podłoże podstawowe z wskaźnikiem*
	bez węglowodanów	z glukozą	z laktozą
Candida albicans
Kontrola (bez bakterii)

* purpura bromokrezolowa

„+” - wzrost drobnoustrojów; „-„ - brak wzrostu; kw - zakwaszenie podłoża (żółte zabarwienie wskaźnika); gaz - wytworzenie gazu (CO₂) w probówce Durhama

Drogi metabolizowania węglowodanów (utlenianie lub fermentacja) można także określić na buforowanym podłożu Hugha - Leifsona w wersji O/F (Tab.7):

Tab.8

Drobnoustrój	Podłoże Hugha - Leifsona (test 0/F)*
	fermentacja		utlenianie
E.coli
P.aeruginosa
baumannii
Kontrola(bez bakterii)

*podłoże zawiera 1% węglowodanu i błękit bromotymolowy. Przed posiewem pożywkę ogrzewa się w temp.100⁰C przez 20 min (usunięcie tlenu).Badany szczep posiewa się równolegle do dwóch probówek z podłożem; jedną z nich pokrywa się płynną parafiną. Hodowla w temp. 35-37⁰C przez 2 do 5 dni.

Interpretacja wyników:

• zmiana zabarwienia z zielonej na żółtą w obu probówkach - rozkład węglowodanu na drodze fermentacji

• zabarwienie żółte tylko w probówce nie pokrytej parafiną (warunki tlenowe) i brak zmian w probówce pokrytej parafiną (warunki beztlenowe) - utlenianie węglowodanu

• brak zmiany zabarwienia podłoża w obu probówkach, lub barwa niebieska (alkalizacja) - drobnoustrój nie rozkłada węglowodanu.

4. Metabolizm wybranych drobnoustrojów.

Zaobserwuj zmiany zachodzące na podłożach i uzupełnij tabelkę.

Tabela 9.

Podłoże	drobnoustrój
		E.coli	P.mirabilis
Kliglera
podłożu Christensena
Wykrywanie rozkładu tryptofanu do indolu.

---