Cytometria przepływowa
Karolina Wychowska
Cytometria przepływowa
Karolina Wychowska
Cytometria przepływowa
• technika analityczna
• pozwala na pomiar rozproszonego światła
lub sygnałów fluorescencji emitowanych
przez odpowiednio naświetlone komórki
• pozwala ocenić zarówno jakościowo, jak i
ilościowo właściwości fizyczne i biologiczne
komórek oraz niektórych ich komponentów
• odkryta jako ulepszenie mikroskopu
fluorescencyjnego
Cytometry przepływowe-
analizatory
• ocena ekspresji
antygenów
powierzchniowych i
wewnątrzkomórko
wych (np. cytokin,
hormonów)
• ocena aktywności
enzymów (np.
kinaz, kaspaz)
• ocena ekspresji
genów i
transkrypcji mRNA
dla różnych
produktów
komórkowych
Cytometry przepływowe-
sortery komórkowe
• zbieranie i analizowanie
danych o przepływających
komórkach,
• sortowanie - odchylania
płynących cząstek zgodnie z
różnicami ich potencjału
elektrycznego
• wykorzystywane są do
izolacji bardzo rzadkich
komórek, takich jak
zawieszone w krwi komórki
nowotworowe, erytrocyty
płodowe, czy też komórki
zmodyfikowane genetycznie
• znalazły zastosowanie przy
przeszczepach oraz
zapłodnieniach
pozaustrojowych
Schemat budowy cytometru
• Filtry dichroiczne odbijają fale krótkie i pozwalają na transmisję
fal długich; filtry środkowoprzepustowe przepuszczają jedynie
światło z bardzo wąskiego zakresu długości fali. Użycie
właściwych filtrów pozwala stwierdzić obecność określonych
znaczników w badanej próbce
Zasada działania cytometru
przepływowego
• znakowane komórki formowane są w cienki
strumień, który z odpowiednią prędkością
przesuwa się w stronę strefy pomiaru
• każda pojedyncza cząstka naświetlana jest
zogniskowaną wiązką laserową
• światło ulega rozproszeniu i jednocześnie
wzbudza przyłączone do komórek
fluorochromy
• powstałe sygnały mierzone są za pomocą
odpowiednich detektorów, przemieniane na
impulsy elektryczne, wzmacniane i przesyłane
do komputera celem dalszej obróbki,
przechowywania i analizy.
Zasada działania cytometru
przepływowego
• Zawieszone
w cieczy
komórki
przechodzą
przez wiązkę
światła i
emitują
charakterysty
czne dla
siebie
sygnały
Wykorzystanie cytometrii
przepływowej
• ocena immunofenotypu
• badanie cyklu mitotycznego komórek
nowotworowych
• określanie tzw. oporności wielolejkowej
• diagnostyka niektórych chorób
autoimmunizacyjnych
• szybkie wykrywanie i wstępna identyfikacja
mikroorganizmów
• oznaczanie ludzkich antygenów
leukocytarnych
• analiza wielkości i ziarnistości komórek oraz
odzwierciedlanie etapu cyklu podziałowego
• ocena efektywności terapii odczulającej
Bibliografia
• Anna Kurcek , Cytometria przepływowa [online],
[dostęp: 18 stycznia 20013], Dostępny w
Internecie:
http://www.e-biotechnologia.pl/Artykuly/Cytometr
• Baran J., 2008. Nowa epoka cystometrii
przepływowej - przewodnik po współczesnych
cytometriach i ich zastosowanie. Postępy Biologii
Komórki 35 (24): 3-15.
• Kaczmarek A., Mackiewicz A., Leporowska E.,
Osawa T., 2002. Rola i miejsce cytometrii
przepływowej w diagnostyce
klinicznej.Współczesna Onkologia 6 (6): 366-373.