background image

 

 

Laboratorium z biochemii 

„Wykrywanie cukrowców kwasów nukleinowych (DNA)  

w ekstrakcie drożdżowym.” 

 

 

 

Data ćwiczenia: 20.10.15 

 

 

 

 

 

Skład sekcji: 

Marta CZEKAJ 

Agata CZEMERAJDA 

Weronika SERAFIMOWICZ 

Natalia POTRZEBOWSKA 

 

 

 

background image

 

I. 

WYKONANIE DOŚWIADCZENIA 

 

Otrzymanie ekstraktu drożdżowego: 

- Do zlewki przeniesiono kilka gramów drożdży piekarskich, a następnie dodano 250 ml 
wody. 
- Z tak otrzymanego ekstraktu pobierano odpowiednie ilości do prób na obecność cukrowców 
oraz DNA. 

 

1.  Próba Molischa – odróżnianie cukrowców od innych związków organicznych: 

 

Do probówki odmierzono 1 ml ekstraktu oraz dodano 4 ml odczynnika Molischa. 

 

Podwarstwiono trzema mililitrami stężonego kwasu siarkowego pipetą po ściance skośnie 
ustawionej probówki. 

 

2.  Próba Biala na pentozy: 

  Do probówki odmierzono 5 ml odczynnika Biala i ogrzewano we wrzącej łaźni wodnej 

przez 5 minut. 

 

Następnie do probówki wprowadzono 1 ml badanego roztworu. 

 

Ogrzewano przez kilka kolejnych minut w łaźni wodnej. 

 

3.   Wykrywanie DNA metodą dwufenyloaminową: 

 

Do probówki wprowadzono 1 ml badanego roztworu oraz 4 ml odczynnika 
dwufenyloaminowego. 

 

Ogrzewano we wrzącej łaźni wodnej przez 10 minut. 

 

4.  Wykrywanie kwasu fosforowego: 

 

Do probówki odmierzono 1 ml ekstraktu drożdżowego.  

  Dodano 2-3 krople roztworu amoniaku do uzyskania alkalicznego odczynu. 

 

Ciecz zakwaszono stężonym kwasem azotowym (V) i dodano 3 ml molibdenianiu amonu.  

 

Ogrzewano w łaźni wodnej do wrzenia. 

 

5.  Reakcja Feulgena na deoksyrybozę: 

 

Do probówki odmierzono 1 ml ekstraktu drożdżowego. 

  Dodano 2 krople 1M roztworu HCl. 

 

Probówkę umieszczono we wrzącej łaźni wodnej na 5 minut.  

 

Po oziębieniu doprowadzono pH do 5 przy pomocy 0.1 M roztworu NaOH. 

 

Następnie dodano około 25 kropel odczynnika Schiffa. 
 

 

 

 

 

background image

 

II. 

OBSERWACJE 

 

1.  Próba Molischa – zaobserwowano w probówce fioletowy krążek i zielone zabarwienie 

poniżej krążka. 

2.  Próba Biala - po dłuższym czasie inkubowania zaobserwowano utworzenie się kompleksu o 

barwie zielonej. 

3.  Wykrywanie kwasu fosforanowego – utworzył się kompleks o żółtym zabarwieniu.  

4.  Wykrywanie DNA metodą dwufenyloaminową – zaobserwowano utworzenie się 

niebieskiego zabarwienia. 

5.  Reakcja Feulgena na deoksyrybozę – uzyskano czerwone zabarwienie w probówce. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 2 

 

 

 

     3 

 

 

 

 

 

 

background image

 

III. 

WNIOSKI:  

 

W próbie Molischa zaobserwowano fioletowy krążek, który świadczy o obecności cukrowca 

(heksozy lub pentozy) w badanym ekstrakcie drożdżowym, zaś zielona barwa poniżej 

pierścienia mówi o zanieczyszczeniach pochodzących z α-naftolu. 

 

Wykonana próba Biala świadczy o obecności pentoz. Te pod wpływem ogrzewania reagują  

z orcyną w kwaśnym środowisku dając zielona barwę. 

 

Wykrywanie DNA metodą dwufenyloaminową mówi nam, że w badanej próbie występuje 

kwas dezoksyrybonukleinowy, ponieważ otrzymaliśmy barwny kompleks (niebieski) podczas 

ogrzewania probówki z ekstraktem drożdżowym, kwasem siarkowym, dwufenyloaminą oraz 

kwasem octowym. 

 

Kwaśny roztwór molibdeny amonu wraz z ortofosforanem (obecym w badanej próbie) 

doprowadził do powstania żółtej barwy, co świadczy o obecniości soli amonowej kwasu  

4-trójmolibdenianofosforanowego. 

 

Przeprowadzona reakcja Feulgena z udziałem kwasu  solnego i fuksyny ukazała nam barwę 

różowo-czerwoną, co świadczy o obecności w ekstrakcie drożdżowym deoksyryboz.