OZNACZANIE BAKTERII GRUPY coli
/wg PN-EN ISO 9308 -1 metoda filtrów membranowych/
Metoda filtrów membranowych zalecana jest do badania wody zawierającej małe
ilości poszukiwanych bakterii, a więc wody przeznaczonej do picia i potrzeb gospodarskich, może być również wykorzystana w badaniu wód zanieczyszczonych i ścieków po uprzednim rozcieńczeniu tych próbek.
Wykrywanie bakterii grupy coli metodą filtrów membranowych polega na przesączeniu określonej objętości wody lub ścieków przez jałowy filtr i inkubacji na określonym podłożu. Bakterie w trakcie sączenia zostają zatrzymane na filtrze, który umieszcza się na pożywce wybiórczej, rozwijając się w czasie inkubacji tworzą na powierzchni filtra kolonie o typowym wyglądzie.
Materiał: woda badana (wodociągowa, powierzchniowa np. rzeczna)
Odczynniki i aparatura:
• zestaw do filtracji membranowej
• płytki Petriego z podłożem Endo
Wykonanie:
1. Przed użyciem aparat filtracyjny wysterylizować w autoklawie w temperaturze 120°C przez 15 minut.
2. Zmontować aparat filtracyjny (lejek umieścić w kolbie ssawkowej, połączonej z pompą próżniową, jałową pęsetą nałożyć na porowatą płytkę filtr membranowy).
3. Wlać odpowiednią ilość badanej wody do lejka (dla wody kranowej 100 ml, dla wód powierzchniowych 1 ml z dodatkiem 30 ml roztworu soli fizjologicznej).
4. Po przefiltrowaniu ściany lejka spłukać dokładnie ok. 20 ml jałowego roztworu soli fizjologicznej.
5. Zamknąć kranik i wyjałowioną pęsetą przenieść filtr membranowy na płytkę Petriego z podłożem Endo (powierzchnią z bakteriami ku górze), tak aby nie było pęcherzyków powietrza pomiędzy filtrem i podłożem.
6. Płytki Petriego z filtrami umieścić w cieplarce dnem ku górze i inkubować 24 h w 37°C.
7. Po okresie inkubacji policzyć wyrosłe kolonie, tj. ciemnoczerwone z metalicznym połyskiem (tzw. połysk fuksynowy). Jeżeli nie stwierdza się obecności typowych kolonii, należy przeprowadzić badania potwierdzające.