BADANIA IDENTYFIKUJĄCE Escherichia coli
/wg PN-EN ISO 9308-1, metoda szeregu IMViC/
W przypadku konieczności ostatecznego potwierdzenia występowania Eschericia coli w
wodzie, przeprowadza się następujące testy biochemiczne:
• stwierdzenie zdolności bakterii do wytwarzania indolu (I) z tryptofanu (wynik dodatni)
• reakcja z czerwienią metylową (M) (wynik dodatni)
• reakcja Voges-Proskaura (V), stwierdzająca obecność acetylometylokarbinolu (wynik
ujemny)
• zdolność wykorzystywania cytrynianu (C) jako jedynego źródła węgla (wynik ujemny)
Badania identyfikujące Eschericia coli rozpoczyna się od wyizolowania czystych kultur z
pożywki Endo (uzyskanych w oznaczaniu bakterii grupy coli). Hodowlę prowadzi się w temp. 37°C. Reakcje na indol, z czerwienią metylową i odczyn Voges-Proskaura przeprowadza się w probówkach, w których nastąpił wzrost bakterii (zmętnienie pożywki).
1. Wykrywanie indolu
Wytwarzanie indolu sprawdza się po 24-godzinnej inkubacji w wodzie peptonowej z
tryptofanem, dodając do hodowli po ściance probówki kilka kropli odczynnika Ehrlicha.
Pojawienie się czerwonego zabarwienia na granicy płynów świadczy o obecności indolu,
czyli o wyniku dodatnim.
2. Reakcja z czerwienią metylową
Do hodowli (3,4-dniowej) na podłożu Clarka dodaje się 2 krople czerwieni metylowej. Wystąpienie wyraźnie czerwonej barwy wskazuje na zakwaszenie pożywki w wyniku rozkładu glukozy. Świadczy to o dodatnim wyniku reakcji. Kolor żółty określa wynik ujemny, a kolor pomarańczowy lub jasnoczerwony - wynik wątpliwy.
3. Reakcja Voges-Proskaura
Przeprowadzenie tej reakcji pozwala stwierdzić obecność acetylometylokarbinolu. Wykonuje się ją po 24-godzinnej hodowli na pożywce Clarka, dodając do hodowli najpierw 0,6 ml roztworu 6% α-naftolu rozpuszczonego w alkoholu absolutnym, a po dokładnym wymieszaniu - 0,4 ml 40 % KOH. Zawartość probówki miesza się ponownie. Wystąpienie intensywnego różowego lub czerwonego zabarwienia w górnej części płynu oznacza wynik dodatni, czyli obecność acetylometylokarbinolu. W przypadku wyniku ujemnego pożywka nie zmienia barwy lub jest zabarwiona na kolor lekko różowy.
4. Zdolność wykorzystania cytrynianu jako jedynego źródła węgla.
Badanie to przeprowadza się na pożywce Simmonsa. Hodowlę inkubuje się przez 72 h. Brak wzrostu i zmiany zabarwienia ocenia się jako wynik ujemny, co jest cechą charakterystyczną dla Eschericia coli. Natomiast wzrost na pożywce oraz alkalizacja podłoża powodująca zmianę zabarwienia na niebieską określa się jako wynik dodatni, charakterystyczny dla innych pałeczek grupy coli.