Uniwersytet Szczeciński Wydział Biologii |
||
Członkowie grupy |
Rok, kierunek i specjalność |
Data wykonania pomiarów |
|
|
|
Temat: Przechowywanie mikroorganizmów i kultury starterowe. |
||
`
Wprowadzenie
W technikach laboratoryjnych do długotrwałego przechowywania kultur bakteryjnych służy zjawisko anabiozy polegajcie na wprowadzeniu bakterii danej hodowli w stan krańcowego obniżenia aktywności życiowej, zwykle w odpowiedzi na niekorzystne warunki środowiska naturalnego, jak np. zbyt wysoka albo niska temperatura, niedostatek tlenu czy też wody. Można ją zaobserwować głównie u organizmów prostych. Celem metody jest uzyskanie struktur przetrwalnikowych które następnie przechowuję się w niskich temperaturach w środowisku np: glicerolu, pełniącego funkcję krioprotektanta, zapobiegając zamarzaniu roztworu w którym dane drobnoustroje się znajdują. W ogólno pojętych metodach przechowywania stosuję się anahydrabiozę (odparowanie) kriobiozę (zamrażanie) osmobiozę (odwadnianiem pod wpływem zmian ciśnienia osmotycznego) anoksybiozę (stan spoczynku na skutek braku tlenu) a używanymi metodami są, liofilizacja, suszenie, zamrażanie a także okresowe przeszczepianie w którym nie wprowadzamy organizmów w stan anabiozy. Celem przechowywania jest stworzenie kolekcji przemysłowych służących do przygotowywania i dostarczania czystych kultur do zakładów produkcyjnych oraz produkcji szczepionek.
Cel doświadczenia
Celem doświadczenia była ocena metod przechowalniczych oraz uzyskanie po okresie przechowalniczym dobrej jakości kultur starterowych.
3. Wykonanie:
Przechowywanie E.coli na podłożach stałych (ćw. 1)
posiew szczepu E.coli na podłoże LA na płytce, skosie oraz słupku. Inkubować w temperaturze 37 °C przez 24h, następnie przenieść do temp. 4°C i przechowywać przez okres semestru.
Przechowywanie E.coli w postaci konserwy zamrażalniczej (ćw. 1)
wykonać konserwy zamrażalnicze szczepu E.coli w probówkach typu Eppendorf
aseptycznie wymieszać 0,5 ml kultury płynnej E.coli z 0,15 ml jałowego glicerolu, umieścić na okres semestru w temp. -20°oraz -80°C.
Przechowywanie bakterii przetrwalnikujących Bacillus subtilis (ćw. 1)
wymusić wytwarzanie przetrwalników przez zmianę warunków środowiska. Posiać bakterie na skos i hodować przez okres 7 dni w 37°C. Przechowywać skosy ze sporylującymi bakteriami przez okres semestru w 4°C
Przechowywanie bakterii o zdolnościach proteolitycznych przeniesionych z podłoża mlecznego na jałowym podłożu LA (ćw. 5)
szczepy przechowywano na płytce, skosie i słupku. Czas inkubacji trwał 4 dni w temperaturze 20°C oraz po tym okresie materiał przeniesiono do 4°C na czas ok 4-5 tygodni (do końca semestru).
Porównanie wybranych metod przechowania kultur mikroorganizmów (ćw11)
Z preparatów z ćw. 1 wykonać posiewy redukcyjne na świeże podłoża LA oraz inkubować w 37°C przez 24h, a następnie obserwować intensywność wzrostu.
Przechowywane szczepy proteolityczne ćw. 5 należy przesiać z płytek, ze skosów i słupków na świeże podłoże mleczne. Płytki inkubować w temp. 20°C. Po inkubacji porównać intensywność wzrostu.
4. Wyniki i wnioski
Po okresie przechowalniczym można stwierdzić o przydatności metod stosowanych w przypadku E.coli oraz B.subtilis. Wymienione drobnoustroje wykazały po okresie przechowalniczym zdolność wzrostu, nie stwierdzono także zanieczyszczeń. Mikroorganizmy o właściwościach proteolitycznych uzyskane w ćw. 5 nie przejawiły wzrostu po inkubacji co może świadczyć o wątpliwości wykożystania tej metody w technikach labolatoryjnych. Prawdopodobne jest iż w związku z przechowywaniem bakterie te utraciły zdolność do proteolizy co było przyczyną braku wzrostu na podłożu mlecznym.