• Analiza DNA i RNA

• Ocena ilościowa

• Pomiar absorbancji przy długości fali 260nm i 320nm

Stężenia oblicza się według następujących wzorów:

1. Dwuniciowy DNA: C (μg/ml) = (A260-A320) x 50 x rozcieńczenie

2. Jednoniciowy DNA: C (μg/ml) = (A260-A320) x 33 x rozcieńczenie

3. RNA: C (μg/ml) = (A260-A320) x 40 x rozcieńczenie

2. Elektroforeza w żelu agarozowym razem z wzorcem stężeń DNA/RNA

1. stężenie żelu: 0,8%

2. 0,5 μg/μl bromku etydyny

3. czas: 2h

4. napięcie: 70V

5. oglądanie preparatu po rozdziale w świetle o długości fali 312nm (aby nie zniszczyć materiału)

Ocena jakościowa

1. Pomiar absorbancji przy długościach fali 260nm, 280nm i 320nm

Stosunek A(260-320)/A(280-320) świadczy o zanieczyszczeniu preparatu kwasów nukleinowych białkami:

1. 1,8 - 2,0 - preparat jest wystarczająco oczyszczony

2. 1,5 - preparat zawiera 50% białka

2. Elektroforeza w żelu agarozowym

1. DNA

• stężenie żelu: 0,8%

• 0,5 μg/μl bromku etydyny

• czas: 2h

• napięcie: 70V

• oglądanie preparatu po rozdziale w świetle o długości fali 312nm (aby nie zniszczyć materiału)

• zwarty prążek bez widocznych smug świadczy o dobrej jakości preparatu (wysokocząsteczkowy, niezdegradowany)

• RNA

• stężenie żelu: 1,0-1,5%

• czas: 2h

• napięcie: 70V

• wynik rozdziału:

• dwie dobrze widoczne frakcje 18S i 28S rRNA

• frakcja mRNA widoczna w postaci smugi

• czoło - tRNA oraz niskocząsteczkowe RNA

• Oligonukleotydy

• żel poliakrylamidowy (10%)

• HPLC

---