Badanie  aktywności  amylazy  –  instrukcja  
 

Na  stojaku  znajdują  się  wszystkie  konieczne  roztwory:  

-­‐ roztwór  alfa-­‐amylazy  gorzelnianej  (1,5  mg  /1ml)  
-­‐ woda  (pierwsza  próba,  optymalizacja  temperatury)  

-­‐ roztwory  NaCl,  CuSO

4

,  AgNO

3

 

-­‐ bufory  o  pH  3;  5;  7,6.  

 

Przed  rozpoczęciem  ćwiczenia  należy:    

-­‐ umieścić  w  łaźni  wodnej  roztwór  skrobi  (duża  butelka)  

-­‐ umieścić  w  lodówce  roztwór  skrobi  w  falkonie  (pomiar  aktywności    

w  zależności  od  temperatury)  

-­‐ do  jednej  z  próbówek  dodać  1ml  płynu  Lugola  i  1  ml  samej  skrobi  w  celu  

obserwacji  zabarwienia  roztworu  bez  działania  enzymu,    

-­‐ do  drugiej  próbówki  dodać  1ml  płynu  Lugola  oraz  1  ml  wody  w  celu  uzyskania  

roztworu  o  końcowej  barwie  (po  strawieniu  skrobi).  

 
Obserwacja  stopniowego  rozkładu  skrobi  przez  amylazę  w  wodzie  

 

1. Do  szklanej  zlewki  odpipetować  1ml  roztworu  amylazy,  oraz  przelać    

z  falkona  9ml  wody  (roztwór  umieszczony  na  stojaku).  

2. Umieścić  zlewkę  z  mieszaniną  enzymu  i  wody  w  podgrzewaczu  na  ok.  1min.  
3. Przygotować  12  probówek  napełnionych  1ml  płynu  Lugola  

4. Dodać  do  mieszaniny  amylazy  z  wodą  10ml  skrobi  z  butelki  znajdującej  się  w  

łaźni  wodnej  

5. Od  razu  pobrać  1ml  mieszaniny  i  dodać  ją  do  probówki  z  płynem  Lugola  

6. Co  1min  pobierać  1ml  mieszaniny  reakcyjnej  i  dodawać  do  probówki  z  płynem  

Lugola  

7. Zaobserwować  zmiany  barwy  roztworów.    

8. Zapisać  czas  po  jakim  czasie  skrobia  została  całkowicie  strawiona.    
 

UWAGA:  otrzymane  reakcje  barwne  będą  stanowiły  punkt  odniesienia  w  następnych  
pomiarach.  Proszę  ich  NIE  WYRZUCAĆ!  

 

 
Badanie  inhibitorów  i  aktywatorów  amylazy    

 

1. Do  zlewki  odpipetować  1ml  roztworu  amylazy,    
2. Przelać  do  zlewki  z  przygotowanego  falcona  9ml  roztworu  odpowiedniej  soli  

(najpierw  NaCl,  potem  CuSO

4

,  na  końcu  AgNO

3

).    

3. Umieścić  mieszaninę  w  podgrzewaczu  na  ok.  1min.  
4. Przygotować  12  probówek  napełnionych  1ml  płynu  Lugola  

5. Dodać  do  mieszaniny  amylazy  z  odpowiednią  solą,  10ml  skrobi  
6. Od  razu  pobrać  1ml  mieszaniny  i  dodać  go  do  probówki  z  płynem  Lugola  

7. Co  1min  pobierać  1ml  mieszaniny  reakcyjnej  i  dodawać  do  probówki  z  płynem  

Lugola  

8. Zaobserwować  zmiany  barwy  roztworów.    

9. Zapisać  czas  po  jakim  czasie  skrobia  została  całkowicie  strawiona.    
10. Zapisać  zaobserwowane  wyniki  

 
 

Określenie  wpływu  pH  na  aktywność  amylazy  

   

1. Do  zlewki  odpipetować  1ml  roztworu  amylazy,    

2. Przelać  do  zlewki  z  przygotowanego  falcona  9ml  roztworu  buforu    

o  odpowiednim  pH.    

3. Umieścić  mieszaninę  w  podgrzewaczu  na  ok.  1min.  

4. Przygotować  12  probówek  napełnionych  1ml  płynu  Lugola  
5. Dodać  do  mieszaniny  amylazy  z  buforem,  10ml  skrobi  

6. Od  razu  pobrać  1ml  mieszaniny  i  dodać  go  do  probówki  z  płynem  Lugola  
7. Co  1min  pobierać  1ml  mieszaniny  reakcyjnej  i  dodawać  do  probówki  z  płynem  

Lugola  

8. Zaobserwować  zmiany  barwy  roztworów.    
9. Zapisać  czas  po  jakim  czasie  skrobia  została  całkowicie  strawiona.    

10. Zapisać  zaobserwowane  wyniki  

 
Porównać  otrzymane  wyniki  z  wynikami  dla  wody  (pH  7)  

 
 
Określenie  wpływu  temperatury  na  aktywność  amylazy  

 
+4

0

C  

 

1. Przygotować  12  probówek  napełnionych  1ml  płynu  Lugola  
2. Przemyć  zlewkę  zimną  wodą  !!!  

3. Przelać  do  zlewki  z  przygotowanego  falcona  chłodzonego  w  lodówce  

9ml  wody  i  10ml  skrobi  

4. Do  zlewki  odpipetować  1ml  roztworu  amylazy  

5. Co  1min  pobierać  1ml  mieszaniny  reakcyjnej  i  dodawać  do  probówki  z  płynem  

Lugola  

6. Zaobserwować  zmiany  barwy  roztworów.    
7. Zapisać  zaobserwowane  wyniki  

 

 
+70

0

C    

1. Przelać  do  zlewki  z  przygotowanego  falcona  9ml  wody  i  10ml  skrobi  

i  ustawić  temperaturę  podgrzewacza  na  ok  40

0

C  

2. Przygotować  12  probówek  napełnionych  1ml  płynu  Lugola  

3. Do  zlewki  odpipetować  1ml  roztworu  amylazy  
4. Od  razu  pobrać  1ml  mieszaniny  i  dodać  go  do  probówki  z  płynem  Lugola  
5. Co  1min  pobierać  1ml  mieszaniny  reakcyjnej  i  dodawać  do  probówki  z  płynem  

Lugola  

6. Zaobserwować  zmiany  barwy  roztworów.    

7. Zapisać  zaobserwowane  wyniki  

 
Porównać  otrzymane  wyniki  z  wynikami  dla  temperatury  pokojowej