Ćwiczenie 2. Część praktyczna

I. Odczyny oparte na reakcji aglutynacji czynnej (bezpośredniej)

Zadanie 1. Odczyn aglutynacji szkiełkowej

1. Na szkiełka podstawowe nanieś po kropli wzorcowych surowic i kroplę 0,85% NaCl (kontrola) według schematu:

2. Do wszystkich pól nanieś po kropli zawiesiny badanego szczepu bakteryjnego i dokładnie wymieszaj. Szkiełka z testem odstaw na 10 minut, a następnie odczytaj wynik i zaznacz na powyższym schemacie, w której próbie nastąpiła aglutynacja.( )

3. Zinterpretuj wynik tzn. ustal jaki szczep bakterii był w badanym materiale ……………………………………………………………………………………………………………

Zadanie 2. Odczyn aglutynacji probówkowej - ustalanie miana surowicy badanej

Miano surowicy to………………………………………………………………………………………

1. Schemat przygotowania szeregu rozcieńczeń surowicy badanej (kontrola 0,85% NaCl).

UWAGA ! Na wstępie nanosić 0,5 ml 0,85% NaCl do probówek, po każdorazowym przeniesieniu 0,5 ml dokładnie wymieszać

2. Do przygotowanych probówek z rozcieńczeniami surowicy i kontroli dodajemy po 2 krople zawiesiny bakteryjnej.

3. Po 24 godzinach inkubacji (37°C) zaznacz na poniższym schemacie, w których probówkach wystąpiła aglutynacja ( + ) i odczytaj miano surowicy.

Szereg z zawiesiną bakterii

Miano surowicy dla szeregu z zawiesiną bakterii wynosi ……………………………………….

II. Odczyny oparte na reakcji aglutynacji biernej (pośredniej)

Zadanie 3. Odczyn hemaglutynacji biernej - ustalanie miana surowicy badanej

1. Schemat przygotowania szeregu rozcieńczeń surowicy badanej

UWAGA ! Na wstępie nanieś po 0,1 ml 0,85% NaCl do wyznaczonych studzienek, po każdorazowym przeniesieniu 0,1 ml dokładnie wymieszaj

2. Zaproponuj dwie kontrole, które są niezbędne do prawidłowego wykonania odczynu hemaglutynacji, mając do dyspozycji: 0,85% NaCl, 5% zawiesinę krwinek opłaszczonych uprzednio antygenem, wodę destylowaną, 5% zawiesinę krwinek nieopłaszczonych i surowicę badaną

3. Do wszystkich studzienek (oprócz kontroli) nanosimy po kropli 5% zawiesiny krwinek opłaszczonych uprzednio antygenem. Płytkę pozostawiamy w temperaturze pokojowej, wynik odczytujemy po 2 godzinach

4. Zinterpretuj wynik. Zaznacz na powyższym schemacie, w której studzience nastąpiła hemaglutynacja. Miano surowicy wynosi………………………………………………………………..

Zadanie 4. Odczyn lateksowy

1. Na szkiełkach umieść po kropli prób badanych, kontroli dodatniej i kontroli ujemnej

2. Nanieś kroplę odczynnika lateksowego ASO na każde z pól testowych, użyj bagietki do równomiernego rozprowadzenia mieszaniny w obrębie pola

3. Poruszaj szkiełkiem ruchem rotacyjnym przez 2 minuty, a następnie natychmiast odczytaj wyniki

4. Zaznacz na powyższym schemacie, w której próbie nastąpiła aglutynacja.( )
interpretacja wyniku ……………………………………………………………………………………

0,85 % NaCl

Surowica wzorcowa przeciw E.coli O139

Surowica wzorcowa przeciw E.coli O157:H7

Surowica wzorcowa przeciw E.coli O111

KONTROLA

Badany szczep bakteryjny

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

KONTROLA

1 ml surowicy badanej

1:3200

1:1600

1:800

1:400

1:200

1:100

1:50

1:25

0,5 ml 0,85 % NaCl

1:25 1:50 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 KONTROLA

Surowica badana od pacjenta Y

Surowica badana od pacjenta X

Kontrola ujemna

Kontrola dodatnia

Odczynnik lateksowy

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,1ml

0,2 ml surowicy badanej

….…………………………..…

….…………………………..…

KONTROLA II

KONTROLA I

Rozcieńczenie surowicy

1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120

0,1 ml 0,85 % NaCl

---