GRZEGORZ WOJTASIŃSKI WROCŁAW

WYDZIAŁ TŻ rok II

GRUPA 10

Ćwiczenie nr 17

Oznaczenie zawartości azotu ogólnego metodą Kjeldahla

Azot wchodzi w skład licznych związków o podstawowym znaczeniu-aminokwasów, białek, kwasów nukleinowych, witamin i koenzymów. Oznaczenie jego zawartości metodą Kjeldahla w danej próbce organicznej polega na jej mineralizacji w stężonym kwasie siarkowym. Azot występujący w białkach i aminokwasach tej próbki przechodzi w siarczan amonowy z którego później w środowisku zasadowym zostaje uwolniony amoniak a następnie pochłonięty w odmierzonej ilości 0,1 molowego kwasu solnego. Do tego kwasu dodaje się dwie krople odpowiedniego wskaźnika i roztwór miareczkuje. Różnica pomiędzy całkowitą ilością użytego kwasu i ilością kwasu zobojętnionego odpowiada ilości kwasu który przereagował z amoniakiem.

Przebieg ćwiczenia:

Z dokładnością do 0,0001g odważyłem na wadze technicznej dwie próbki kaszą kukurydzianą i jaglaną i umieściłem je w kolbach Kjeldhla (osobno każdą). Do każdej kolby dodałem 2g miaszaniny selenowej i następnie przy ciągłym mieszaniu dodałem 5 cm³ 30% roztworu nadtlenku wodoru (środek ułatwiający mineralizacje).Następnie (pod wyciągiem) ostrożnie małymi porcjami dodałem 10 cm³ stężonego kwasu siarkowego i całość dokładnie wymieszałem. Kolbe zamocowałem na odpowiednim statywie i ogrzewałem przez 15 min zgodnie z zaleceniami instrukcji. Następnie po ostygnięciu kolby dodałem do niej mieszając 5 cm³ 30% roztworu nadtlenku wodoru. Ponownie ogrzewałem kolbę i od momentu gdy roztwór stał się klarowny kontynuowałem ogrzewanie przez 15 min. Oziębiłem kolbę i zawartość przeniosłem ilościowo do kolbki miarowej o poj 100 cm³. Kolbę Kjeldahla przepłukałem dwukrotnie małymi porcjami wody destylowanej i popłuczki dołączyłem do kolby miarowej. Następnie dodałem dwie krople oranżu metylowego, uzupełniłem kolbkę wodą do kreski i dokładnie wymieszałem.

W wyniku mineralizacji cały azot został związany w postaci siarczanu amonowego. Uwolnienie i destylacje amoniaku przeprowadziłem w aparacie Parnase Wagnera. Przed destylacją amoniaku doprowadziłem do wrzenia wodę w generatorze pary. Wylot chłodnicy zanurzyłem w 25 cm³ 0,1 molowego roztworu kwasu solnego znajdującego się w odbieralniku. Do kolbki destylacyjnej 25 cm³ oznaczanego roztworu i dołączyłem do niego 30% roztwór wodorotlenku sodowego. Od momentu kiedy pierwsza kropla destylatu spłynęła do odbieralnika, prowadziłem destylacje jeszcze przez 15 min. Po zakończeniu destylacji do odbieralnika z kwasem solnym w którym został pochłonięty amoniak, dodałem dwie krople oranżu metylowego i roztwór miareczkowałem 0,1 molowym NaOH.

Objętości 0,1 molowego NaOH podczas miareczkowania:

a) dla kaszy kukurydzianej: b) dla kaszy jaglanej:

V₁=19,5 V₁=15,9

V₂=18,8 V_śr=19,36 V₂=15,0 V_śr=15,90

V₃=19,8 V₃=16,8

25cm³-19,36cm³=5,64cm³-tyle kwasu solnego 25cm³-15,90cm³=9,10cm³-tyle kwasu solnego

przereagowało z amoniakiem w przypadku przereagowało z amoniakiem w przypadku

kaszy kukurydzianej. kaszy jaglanej.

a) obliczenia dla kaszy kukurydzianej:

HCL + NH₄(OH) = NH₄CL + H₂O

1mol 1mol 1mol 1mol

C_HCL=n/V_HCL → n=C_HCL*V_HCL → n=0,1mol/dm³*0,00564dm³=0,000564mola

n_HCL=n_NH4OH=0,000564

M_NH4OH=35

n=m/M→ m=n*M → m=35*0,000564=0,01974g-NH₄OH

0,01978g-35g

xg-14g

x=0,0078g -tyle N₂ w 25cm³ badanej próbce kaszy kukurydzianej

0,0078g-25cm³

xg-100cm³

x=0,0315g-tyle jest azotu w całej próbce kaszy kukurydzianej

2,0610g-masa badanej kaszy kukurydzianej

2,0610g-100%

0,0315g-x%

x=1,5324%-zawartość procentowa azotu w kaszy kukurydzianej.

b) obliczenia dla kaszy jaglanej:

n=C_HCL*V_HCL=0,1*0,0091=0,00091mola=n_NH4OH

n=m/M→ m=n*M→m=0,00091*35=0,03185g-tyle jest NH₄OH w 25cm³ kaszy jaglanej

0,03185g-35g

xg-14g

x=0,0127g-tyle N₂ w 25cm³ kaszy jaglanej

0,0127g-25cm³

xg-100cm³

x=0,0509g-tyle jest N₂ w całej próbce kaszy jaglanej

2,0920-masa badanej kaszy jaglanej

2,0920-100%

0,0509-x%

x=2,4359%-zawartość procentowa N₂ w kaszy jaglanej.