Sprawozdanie z chromatografii cienkowarstwowej
Celem pierwszego ćwiczenia jest potwierdzenie przydatności chromatografii cienkowarstwowej do rozdziału i identyfikacji barwników roślinnych zawartych w świeżych liściach.
Roztarto w moździerzu liście pietruszki wraz z piaskiem w celu wydobycia z liści barwników. Następnie do otrzymanej papki dodano kilka ml acetonu, położono na mieszaninie małą kulkę z zbitej waty, wciągnięto przez pipetkę Pasteura ekstrakt i włożono do probówki. Za pomocą kapilary naniesiona została próbka ekstraktu na miejsce startu na płytce, i włożono ją do komory do rozwijania chromatografu, do której uprzednio wlana została mieszanina eteru naftowego, toluenu i etanolu w stosunku 8:3:2. Gdy czoło eluenta znalazło się na linii końcowej wyjęto płytkę z komory i obrysowano poszczególne plamki.
Obliczono Rf dla poszczególnych plamek:
Plama żółtozielona - Rf = 0.75- chlorofil B
Plama sinozielona - Rf = 0.8 - chlorofil A
Plama „żółta” - Rf = 0.61 - ksantofile
Plama (kolor wyblakł) - Rf = 1.0- beta karoten
Chromatogram:
Celem drugiego ćwiczenia było wykrycie które z wzorcowych barwników otrzymałem do analizy.
Na płytkę naniesiono roztwory pięciu wzorców i badaną próbkę. Płytkę umieszczono w komorze z eluentem - mieszaninie toluenu i acetonu w stosunku 3:1. Gdy czoło eluenta znalazło się przy linii końcowej wyjęto płytkę z komory, następnie obliczono Rf dla każdego barwnika. Oto wyniki:
Eozyna - Rf = 0.35
oranż 2-naftolowy - Rf = 0.37
Fluoresceina - Rf = 0.13
Czerwień metylowa - Rf = 0.22
1-fenyloazo-2-naftol (Sudan I) - Rf = 0.96
Moja próbka - Rf = 0.37, Rf = 0.13 Rf = 0.22
Wnioski - moja próbka zawierała następujące barwniki : Fluoresceinę, oranż 2-naftolowy oraz czerwień metylową.
Chromatogram: