3.3.4 Wpływ temperatury na aktywność Trypsyny.
Cel: Wykazanie zależności pomiędzy wartością temperatury, a aktywnością badanego enzymu (trypsyny).
Wykonanie:
Trypsynę rozcieńczono 10-krotnie w 0,001 M HCl. Do pięciu probówek typu ependorf dodano : 50μl roztworu enzymu, 1ml 0,2 M buforu Tris-HCl pH 8,0,
20μl roztworu substratu BAPNA.
Zawartość probówek wymieszano i inkubowano każdą w innej temperaturze - 0, 25, 37, 47, 57[oC] przez 30 minut.
Po zakończeniu inkubacji do każdej probówki dodano po 100μl stężonego kwasu octowego, który przerwał reakcję enzymatyczną.
Zmierzono wartość absorbancji prób przy długości fali 405nm.
Otrzymano następujące wyniki:
Tabela 1. Zależność aktywności enzymu od temperatury
Lp. |
Temperatura [oC] |
Absorbancja [λ=405nm] |
Aktywność właściwa Trypsyny |
1 |
0 |
0,093 |
7,75 |
2 |
25 |
0,250 |
20,83 |
3 |
37 |
0,387 |
32,25 |
4 |
47 |
0,382 |
31,83 |
5 |
57 |
0,239 |
19,92 |
Aktywność właściwą trypsyny obliczono z zależności:
Jeżeli :
0,012mg - 0,093
1mg - x
X= 0,093/0,012 = 7,75
0,012mg - 0,250
1mg - x
X= 20,83
Analogicznie wykonano pozostałe obliczenia, zależność aktywności właściwej trypsyny od temperatury wykazano na wykresie:
Wykres 1. Zależność Aktywności enzymu od temperatury.
Wnioski:
Temperatura jest ważnym czynnikiem w reakcjach enzymatycznych, na podstawie uzyskanych wyników możemy stwierdzić, że w niskich temperatura tj 0oC reakcja jest bardzo spowolniona, maksimum aktywności enzym osiąga gdy temperatura inkubacji wynosiła 37-47 oC, znaczy to, że w takiej temperaturze reakcja ta będzie najbardziej wydajna.
W temperaturze wyższej niż 50 oC większość białek enzymowych ulega denaturacji i reakcja przestaje zachodzić - obserwujemy spadek aktywności właściwej enzymu.