Typ: Proteobacteria

Klasa: Alphaproteobacteria

Rząd: Rhizobiales

Rodzina: Brucellaceae

Rodzaj: Brucella

Gatunek: B. abortus (9 biotypów- patogenny dla przeżuwaczy, ludzi)

B. melitensis (3 biotypy, komensal dróg oddechowych)

B. suis (5 biotypów, świnie i inne zwierzęta, ludzie)

B. canis (psy, rzadko ludzie)

B. ovis (owce)

B. neotomae (szczury pustynne)

Morfologia:

• 1887r. Bruce wyizolował od człowieka

• Bang wyizolował od krowy

Charakterystyka:

- koko pałeczki cienkie do 1,5 um.

- G -

- przetrwalniki -

- rzęski -

- otoczki -

- fimbrie -

- tlenowce, ale lepiej rosną w pierwszych pasażach przy dodatku 5-10% CO₂

- podłoża wzbogacone w kry ptozę, krew, surowicę końską oraz w surowicę bydlęcą - ale trzeba upewnić się że nie ma przeciwciał.

- bardzo wolno rosną, po kilku dniach dopiero pierwsze kolonie, do 30 dni trzymamy płytkę

- rosną w formie S, ale B. canis i B. ovis tylko w formie R

Właściwości:

- katalaza +

- oksydaza +

- ureaza +

- H₂S (B.abortus) +

Czynniki wirulencji:

• Brak typowych

• LPS - słabo działa

• Czynnik na poziomie molekularnym , który nie pozwala na wytworzenie fagolizosomu

nie uwalniają się toksyczne enzymy lizosomalne, ziarnistości nie są aktywowane.

• Hamuje wydzielanie TNF - alfa

• Wytwarza katalazę i oksydazę nadtlenkową, które rozkładają nadtlenek wodoru w ziarnistościach, dzięki temu namnażają się w fagocytach i dostają się do węzłach chłonnych a z tamtąd przewodem piersiowym do krwi i roznoszone są po całym organizmie

PATOGENEZA

- Namnażają się w fagocytach skąd przechodzą do węzłów chłonnych i do krwi (roznoszone po całym organizmie).

-W łożysku i błonach płodowych zwierząt są duże ilości węglowodanu- erytriolu, który jest lepiej metabolizowany niż glukoza, dzięki czemu łatwo namnażają się w ciężarnej macicy powodując poronienia.

U nie ciężarnych przechodzą do narządów miąższowych .

U osobników męskich atakuje jądra gdyż tam obecny jest ten cukier, powoduje bezpłodność.

U ludzi występują objawy grypopodobne : gorączka, bóle mięśni, głowy, stawów.

DIAGNOSTYKA

Badanie ściśle według normy głównego inspektoratu weterynaryjnego

1. Badanie serologiczne - szuka się przeciwciał anty-Brucella. Jeśli są to pobieramy materiał do badań.

Materiał do badania : wycinek z łożyska, błon płodowych, całe płody po poronieniu lub

zarodek, wymazy z narządów, mleko, sperma, jądra, najądrza, węzły nadwymienowe,

zmienione fragmenty narządów miąższowych.

2. Badanie bezpośrednie

Rozmazy

Płyny wirujemy

Barwimy podwójnie metodą Gramma

Barwienie zmodyfikowana metodą Ziehl-Neelsena (według Stamp'a) (MZN) gdyż są słabo kwasooporne.

Fuksyna fenolowa 3 min

Spłukujemy wodą

Spłukujemy 1,5% kwasem octowym

Spłukujemy wodą

Dobarwiamy błękitem metylenowym przez 3 min.

Pałeczki są czerwone, a inna flora niebieska.

Badanie serologiczne według norm

1. Badanie screeningowe OKAP - badanie podstawowe.

Jest to odczyn aglutynacji płytkowej.

Wykorzystuje się zabarwione różem bengalskim zabite B.abortus (zawiesinę)

z dodatkiem 0,5% fenolu, przy pH 3,65 - co powoduje że zostają

tylko przeciwciała IgG które reagują z antygenem B.abortus.

Jeśli wynik wątpliwy lub dodatni to wykonuje się kolejne próby.

2. OWD - odczyn wiązania dopełniacza (badanie podstawowe)

3. OA - odczyn Wrighta (badanie skiningowe, bardziej miarodajny od OWD)

Jeśli odczyn wątpliwy to po 21 dniach powtarzamy badanie podstawowe.

Jeśli jeden z wyników wyjdzie dodani (OA) a drugi ujemny (OWD) lub wątpliwy to uzupełniamy o kolejne próby:

4. OWD + OME- odczyn z merkaptanoetanolem ( w surowicy niszczone są IgE, a IgG łatwiej dają wynik +)

5. OA + OAG - odczyn Coombsa czyli odczyn antyglobulinowy, niekompletne aglutyniny, konglomeraty są większe, widoczne

Miano- jest to odwrotność najwyższego rozcieńczenia surowicy przy którym następuje jeszcze widoczny odczyn aglutynacji

OA - 100 < wynik +

50 - 100 wynik wątpliwy

< 50 wynik -

OWD - 20 < wynik +

10 - 20 wynik wątpliwy

< 10 wynik -

OAG - 3, wynik +

1-3 wynik wątpliwy

< 1 wynik -

Badanie biologiczne

Pobrany materiał należy zhomogenizować a następnie podaje się go świnkom morskim w okolicy węzłów chłonnych np. pachwinowych.

Po 3 tygodniach jedną usypiamy , kolejne po 6 tygodniach.

Pobieramy krew do badań.

Śledziona i zmienione tkanki do badania bakteriologicznego.

HODOWLA

Podłoża bulionowe lub agarowe z dodatkiem tryptozy , surowicy końskiej, glukozy,

Antybiotyków (polimyksyna, bacytracyna, wankomycyna, kwas nalidyksowy, nystatyna).

Najlepiej posiewać na bulion i agar.

Inkubować w 37 ^oC

Z pierwszego pasażu inkubować w 5-10% CO₂

Z bulionu raz w tygodniu posiewać na agar i sprawdzać czy wyrośnie.

Kolonie S - do 1mm, okrągłe błyszczące, wypukłe, przezroczyste, jasnomiodowe.

Patogeneza B.abortus

1. Wniknięcie do organizmu.

2. Atakuje węzły chłonne

3. Dostaje się do krwi

- męskie - atakuje jądra i najądrza powodując bezpłodność - pałeczki w nasieniu.

-żeńskie - śledziona, węzły chłonne nadwymieniowe i inne tkanki limfatyczne.

-ciężąrne

* początek ciąży - stan zapalny łożyska

* zaawansowana - dochodzi do poronienia i ataku gruczołów mlekowych.

	Obecność CO2 w pierwszym pasażu	Wytw. H2S	Ureaza na podłożu Christensena	Tionina	Fuksyna zasadowa		Liza przez fagocytoze
B. abortus	+	+	1-2 h (szybko)	+	-	Antygen A	+
B. melitensis	-	-	Warunkowo	+	+	Antygen M	-
B. suis	-	+	0 - 0,5 h (b. szybko)	+	-	Antygen A	-
B. ovis	+	-	-	+	+	-	-
B. canis	-	-	0 - 0,5 h	+	+	-	-
B. neotomae		+	0 - 0,5 h	-	+	Antygen A	-

PASTEURELLA

Typ: Proteobacteria

Klasa : Gammaproteobacteria

Rząd : Pasteurellales

Rodzina : Pasteurellaceae

Rzodzaj : Pasteurella

Gatunek : P.multocida - zwierzęta i ludzi

P.canis - psy

P.dagmatis - psy

P.caballi - konie

P.gallinorum -ptaki

-Ze względu na grubość otoczki, ze względu na antygen otoczkowy P.multocida podzielona na :

- A - komensal górnych dróg oddechowych

- B - posocznica krwotoczna u bydła w Azji B:6

- C - bardzo słabo patogenna

-D - zakaźne zanikowe zapalenie nosa u świń wraz z bakterią Bordetella bronchiseptica

-E - posocznica u bydła w Afryce E:6

-F - u indyków

- Podział ze względu na różnice w budowie ściany komórkowej: typy somatyczne (16)

- Podział epidemiologiczny:

P.multocida subs. multocida- głównie u ludzi

septica - psy, koty, drób, rzadziej ludzie.

gallicida - drób

Morfologia

- Kokopałeczka do ,1,5um

- G-

- rzęski -

- otoczki polisacharydowe +

- Fimbrie : A, B, D powyżej 37^oC +

- bytuje w górnych drogach oddechowych, podczas grypy typy A,B,D wytwarzają fimbrie jako czynnik wirulencji i powoduje zapalenie płuc na tle Pasterellozy

- barwią się bipolarnie metodą Loefflera

- pasaże powodują że bakteria traci bipolrność

- dodatek 5-10% CO₂ wzmaga wzrost w pierwszym pasażu

- rosną na zwykłych podłożach ale dodatek surowicy lub krwi wzmaga wzrost

- hemoliza -

- kolonie: szare, w formie S, niewielkie do 2 mm śrenicy

- zjadliwe szczepy dają szczepy mukoidalne, które posiadają większe otoczki, są to kolonie większe, śluzowate, rozlane

Biochemia

- Indol + dlatego dają mysi zapach

- katalaza +

- oksydaza +

- fermentacja laktozy -

Czynniki wirulencji

1. Otoczka- ma właściwości antyfagocytarne

Grupa A - Kwas hialuronowy

Grupa B - arabinoza, mannoza, galaktoza, szczepy wytwarzają hialuronidazę

Grupa D - kwas podobny do hialuronowego ale oporny na działanie hialuronidazy,

Wrażliwy na chondrioitynaze i heparynaze.

Grupa F - kwas podobny do hialuronowego ale oporny na działanie hialuronidazy,

wrażliwy na chondrioitynazw.

2. fimbrie : A, B, D powyżej 37^oC - ułatwiają kolonizację na komórkach nabłonka

3. Białka powierzchniowe typu poryn - niszczą neutrofile

4. siderofory tj multocydyna - wychwytują Fe

5. neuraminidazy : A, B, D, F - rozrzedzają śluz na nabłonku i powodują paraliż rzęsek nabłonka jelit.

6. dermonekrotoksyna- grupa D - niszy osteoblasty zatok nosowych u świni powodując zanik małżowin nosowych.

Diagnostyka

Materiał do badań z żywych : ropa, wysięk, wymazy z nosa, mleko.

Pośmiertnie : zmieniony fragment narządów miąższowych

BADANIE BEZPOŚREDNIE

Barwienie metodą Gramma

Barwienie metodą Loefflera- preparat utrwalamy w metanolu na 5 minut, nie spłukujemy wodą, wyciągamy, czekamy aż wyschnie i dobarwiamy błękitem Loefflera na 5 minut, następnie spłukujemy wodą, czekamy aż wyschnie i oglądamy pod mikroskopem. Jest to wykrywanie bipolarnych ziarnistości. Widzimy dwie niebieskie kropeczki.

BADANIE BIOLOGICZNE

Homogenizat z pobranego materiału podajemy myszom dootrzewnowo.

Po śmierci pobieramy krew z serca i izolujemy bakterie.

Mannheimia

Typ: Proteobacteria

Klasa : Gammaproteobacteria

Rząd : Pasteurellales

Rodzina : Pasteurellaceae

Rodzaj : Mannheimia

Gatunek: M.haemolytica

Morfologia

- drobne pałeczki

- G-

- otoczka+

-hodowla na agarze z krwią hemoliza β

- indol - bezzapachowo

- toleruje sole żółci - wzrost na podłoży McConkeya

- laktoza +

Czynniki wirulencji

Podobnie jak Pasteurella

1. otoczki polisacharydowe

2. fimbrie

3. LPS - działa pyrogenni

4. proteazy

5. siderofory

6. neuraminidaza

7. leukotoksyna= cytolizyna

Działa na leukocyty i płytki krwi, powoduje że z leukocytów wydostają się enzymy uszkadzające oskrzela, oskrzeliki, pęcherzyki płucne, działa razem z LPS powodując niszczenie miąższu płucnego - z notatek Kasi Woźniak

Tworzy pory w pęcherzykach płucnych powodując ich dysfunkcję.

Niszczy leukocyty, enzymy proteolityczne z leukocytów, niszczy miąższ płucny.

Z notatek A. I.

8. hemolizyna

Diagnostyka

-Wymazy i wysięki z górnych dróg oddechowych tj nosa, gardła. Od padłych zmienione fragmenty płuc.

- preparat bezpośredni: barwienie Gramma i bipolarne

-Postępowanie jak w przypadku Pasteurelli - bezpośrednie barwienie i posiew na agar z krwią w warunkach tlenowych 24h/ 37◦ C

- kolonie: forma S, niewielkie, nie aż tak mukoidalne

	Pasteurella	Mannheimia
B-hemoliza	-	+
Wzrost na McConkeyu	-	+
Indol	+	-
Laktoza, maltoza	-	+
Zapach	Brak	musi
Próba biologiczna	Wrażliwe są myszy	Brak patogenności dla myszy

4

---