MIKROBIOLOGIA PRZEMYSŁOWA W OCHRONIE ŚRODOWISKA

Ćwiczenie 1

Temat:

Pozyskiwanie mikroorganizmów zdolnych do biodegradacji związków ksenobiotycznych - selekcja mikroorganizmów zdolnych do rozkładu katecholu oraz fenolu (cz. 1)

Zagadnienia teoretyczne:

• przypomnienie wiadomości z mikrobiologii ogólnej: typy podłoży bakteriologicznych i techniki posiewów

• pozyskiwanie mikroorganizmów do celów przemysłowych: zasady racjonalnego skriningu, sposoby zwiększania liczebności poszukiwanych mikroorganizmów,

• metody selekcji szczepów

• definicja ksenobiotyku

Część praktyczna:

Materiały:

• próba środowiskowa - woda pobrana z Kłodnicy oraz Rawy

• sterylna sól fizjologiczna

• płytki z zestaloną (agarem) pożywką Kojima ze zmniejszoną do 0,01 g/l ilością ekstraktu drożdżowego

• 0,25 M r-r fenolu

• 0,5 M r-r katecholu

• pipety automatyczne, sterylne końcówki

• głaszczka

• denaturat

Procedura:

• w warunkach sterylnych przygotować podłoża selekcjonujące poprzez dodanie takiej objętości 0,25 M roztworu fenolu lub 0,5 M roztworu katecholu, aby stężenie tych związków w podłożu wyniosło 1 mM (objętość pożywki wylanej na płytkę wynosi 10 ml).

• wysterylizowaną głaszczką delikatnie i dokładnie rozprowadzić przeniesioną objętość roztworów
  i odczekać 20 minut.

• w przerwie wykonać szereg rozcieńczeń próby środowiskowej 10^-1 oraz 10^-2.

• po upływie wyznaczonego czasu z rozcieńczenia 10^-1 i 10^-2 wysiać murawowo 0,1 ml.

• płytki inkubować w temperaturze 25^oC przez 48-72 godzin.

W przypadku słabego wzrostu po upływie wymaganego czasu inkubacji okres hodowli można wydłużyć o kolejne 48 godzin. W przypadku uzyskania intensywnego wzrostu, w celu uniknięcia przerastania płytek i zestarzenia się hodowli, płytki należy przechować do kolejnych zajęć w lodówce.

LITERATURA ŹRÓDŁOWA:

1. CHMIEL A.: „Biotechnologia - podstawy mikrobiologiczne i biochemiczne” - Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa, 1998

2. RÓŻALSKI A.: „Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej” - Wydawnictwo Uniwersytetu Łódzkiego, Łódź, 1996

3. SCHLEGEL G. H.: „Mikrobiologia ogólna” - Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa 2003

4. Źródła internetowe