 | Pobierz cały dokument 12.metody.oczyszczania.bialek.1.doc Rozmiar 37 KB |
12. Metody oczyszczania białek
Poznanie funkcji określonego białka wymaga jego wyizolowania i oczyszczenia (oddzielenia) od tysięcy innych białek obecnych w badanych ekstraktach komórkowych lub
tkankowych. Białko można oddzielić od innych cząsteczek, w tym również od innych białek,
wykorzystując różnice w: rozpuszczalności, wielkości cząsteczek, w wielkości ładunku, a
także w powinowactwie do specyficznych grup chemicznych. Oczyszczanie białek jest możliwe tylko i wyłącznie w warunkach laboratoryjnych z wykorzystaniem odpowiednich preparatów i narzędzi. Jako główne metody e oczyszczania białek możemy zaliczyć:
chromatografię jonowymienną - jedna z najbardziej popularnych metod rozdziału mieszanin wieloskładnikowych, której istotą jest rozdział białek wykorzystujący różnicę w ładunku elektrycznym. Separacja makromolekuł w chromatografii jonowymiennej polega na odwracalnej adsorpcji obdarzonych ładunkiem elektrycznym makromolekuł na złożu jonowymiennym (jonowymieniaczu). Wymieniacz jonowy jest substancją, która w zetknięciu z roztworem wymienia część swoich jonów na jony z roztworu. W jego strukturze można wyróżnić nierozpuszczalną matrycę połączoną wiązaniami kowalencyjnymi z określonymi grupami funkcyjnymi, które ulegają jonizacji i mogą w sposób odwracalny asocjować z jonami przeciwnego znaku, tzw. przeciwjonami;
chromatografię żelową - zwaną również filtracją żelową, stosowana jest do rozdziału białek różniących się masą cząsteczkową i kształtem oraz do oddzielania białek od składników niskocząsteczkowych np. sole (odsalanie). Próbkę nanosi się na szczyt kolumny chromatograficznej jest ona wypełniona porowatymi ziarenkami, małe cząsteczki mieszaniny wnikają w głąb porowatych ziaren, duże natomiast nie wnikają. Droga do momentu wycieku z kolumny, którą musi pokonać każdy ze składników próbki jest więc nierówna. Cząsteczki o najmniejszym ciężarze cząsteczkowym mają do pokonania najdłuższą drogę i dlatego wypływają najpóźniej z kolumny. Białka o dużej masie cząsteczkowej i o efektywnej średnicy większej niż pory ziaren złoża mają do pokonania krótszą drogę w żelu i wędrują najszybciej. Pojawiają się zatem jako pierwsze u wylotu kolumny;
 | Pobierz cały dokument 12.metody.oczyszczania.bialek.1.doc rozmiar 37 KB |