BARWNIKI

Są to substancje syntetyczne pochodzenia naturalnego, które absorbują się lub rozpuszczają w barwionych substratach, dając trwałe połączenia barwne.

Związki stosowane do barwienia posiadają zazwyczaj grupę chromoforową - BARWNĄ (zalicza się tutaj grupy -azo, -nitrozo, -azoksy, -tiokarbonylową) i auksochromową - NASILAJĄCĄ BARWĘ i UŁATWIAJĄCĄ BARWIENIE, tzn. mającą zdolność tworzenia soli z różnymi substratami np. grupy -amino, -hydroksy, -karboksy

PODZIAŁ BARWNIKÓW

- kwaśne (eozyna, fuksyna kwaśna, zieleń jasna)

- zasadowe (błękit metylenowy, fiolet krystaliczny, fiolet goryczki, fuksyna zasadowa)

Barwniki zasadowe to sole, w których barwny jest kation; ich roztwory są na skutek hydrolizy lekko kwaśne. Barwniki kwaśne to sole, w których kationem jest metal, a jonem barwnym anion.

Do barwienia drobnoustrojów stosuje się przeważnie barwniki zasadowe. Wynika to z budowy i składu chemicznego powierzchniowych warstw komórki, jak również ze znacznej zawartości kwasów nukleinowych.

CELE BARWIENIA

• odróżnienie bakterii od składników otoczenia

• odróżnienie poszczególnych grup drobnoustrojów między sobą

• odróżnienie pewnych szczegółów w budowie komórki

• wykazanie zmian czynnościowych w komórce

BARWIENIE BAKTERII ZALEŻY OD

• stanu fizyko - chemicznego barwnika i odbarwiacza

• natury barwionych substratów

• zewnętrznych czynników natury fizycznej i chemicznej wspierających procesy barwienia (np. podgrzewanie preparatów)

• liczby i pozycji grup chromoforowych barwnika, a także od obecności grup auksochromowych

ROZTWORY MACIERZYSTE

Aby sporządzić barwnik przygotowuje się roztwory macierzyste, czyli nasycone roztwory alkoholowe w stosunku 1:10. Na 1g barwnika daje się 10 ml 96% alkoholu etylowego. Rozczyn ten pozostawia się w cieplarce przez 3-6 dni często mieszając. Zlany znad osadu roztwór macierzysty barwnika rozcieńcza się wodą destylowaną i dodaje ewentualnie bejców.

METODY BARWIENIA DROBNOUSTROJÓW

SPORZĄDZANIE PREPARATÓW BAKTERIOLOGICZNYCH

1.Na odtłuszczone szkiełko podstawowe nanosimy za pomocą wyjałowionej ezy 2-3 krople płynu fizjologicznego.

2.Ponownie wyjałowioną ezą pobieramy materiał, wprowadzamy go do kropli soli fizjologicznej i wykonujemy równomierny rozmaz.

3.Wyjaławiamy ezę.

4.Preparat suszymy na wolnym powietrzu.

5.Preparat utrwalamy przez trzykrotne przeciągnięcie przez płomień palnika.

6.Po ostudzeniu zalewamy roztworem barwnika.

7.Spłukujemy wodą, suszymy i oglądamy pod imersją.

CEL UTRWALANIA

• zabicie komórek bakterii

• przyklejenie komórek do szkiełka podstawowego

• częściowa denaturacja białka i rozerwanie struktur komórkowych, co ułatwia wniknięcie barwnika do wnętrza komórki

[Wpisz tekst]

Negatywne-bezbarwne drobnoustroje, tło zabarwione

Pozytywne -zabarwione drobnoustroje, tło bezbarwne

Proste jeden barwnik

Złożone kilka barwników

Barwienie

---