ENZYMY BAKTERYJNE O ZNACZENIU PRZEMYSŁOWYM

Ćwiczenie 7

Temat:

Izolacja szczepów Bacillus z gleby.

Zagadnienia teoretyczne:

• charakterystyka bakterii z rodzaju Bacillus

• charakterystyka spor wytwarzanych przez bakterie z rodzaju Bacillus

• metody eliminacji bakterii przetrwalnikujących

• bakterie patogenne z rodzaju Bacillus

Część praktyczna:

Materiały:

• łaźnia wodna

• próbka gleby

• kolbki z 90 ml jałowej soli fizjologicznej

• pipety sterylne 1 ml, 2 ml, 5 lub 10 ml

• pipety automatyczne, końcówki

• probówki z solą fizjologiczną do szeregu rozcieńczeń

• płytki agarowe

• głaszczka

• denaturat

Procedura:

Izolacja szczepów Bacillus z gleby:

• napełnić łaźnię wodną do połowy objętości i podgrzać do osiągnięcia temperatury 80^oC.

• próbkę gleby w warunkach sterylnych dodać do kolbki z 90 ml jałowej soli fizjologicznej, wytrząsać intensywnie przez 10 minut (otrzymane w ten sposób rozcieńczenie to 10^-1).

• próbę pozostawić na 10 min w celu sedymentacji makrocząstek glebowych,

• po zsedymentowaniu próbki wykonać kolejne rozcieńczenia (od 10^-2 do 10^-4) w probówkach z 9 ml soli fizjologicznej.

• Przygotowane rozcieńczenia roztworu glebowego umieścić w gorącej łaźni wodnej (<80⁰C) na 10 minut. Upewnić się, że poziom wody w łaźni jest wyższy od poziomu roztworu w probówkach. Jest to ważne ze względu na konieczność równomiernego ogrzania próbki.

• podgrzane próbki schłodzić do temperatury pokojowej

• z przygotowanych, schłodzonych roztworów wykonać posiew metodą płytek mazanych (na płytki Petriego z zestalonym podłożem stałym bulion agarowy nanieść po 0,1 ml z rozcieńczeń 10^-2- 10^-4).

• inkubować płytki przez 7 dni.