Ćwiczenie nr 3

(03-06.03.2014)

GRONKOWCE

Rodzaj Staphylococcus

1. Czynniki determinujące chorobotwórczość

2. Epidemiologia i klinika zakażeń wywoływanych przez gronkowce 3. Mechanizmy oporności gronkowców na antybiotyki (produkcja β-laktamaz, metycylinooporność, MLSB, oporność na glikopeptydy) 4. Diagnostyka laboratoryjna zakażeń gronkowcowych Demonstracja:

1. Wzrost szczepów: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis i Micrococcus spp. na podłożu agarowym z krwią baranią i na podłożu Chapmana 2. Oznaczenie koagulazy

3. Badanie mechanizmów lekooporności gronkowców

−

oznaczanie wrażliwości na penicylinę

a. test cefinazowy (krążek z nitrocefiną)

b. metoda dyfuzyjno-krążkowa (krążek z penicyliną)

−

określenie metycylinooporności

a. metoda dyfuzyjno-krążkowa (krążek z cefoksytyną) b. testy wykrywające białka PBP 2a, produktu genu mec A, warunkującego oporność na meticylinę (dla Staphylococcus aureus) c. wykrywanie obecności genu mec A z wykorzystaniem techniki PCR

−

identyfikacja i interpretacja fenotypów oporności na makrolidy, linkosamidy i streptograminy B

a. metoda dwóch krążków

−

badanie wrażliwości na glikopeptydy

o oznaczanie MIC glikopeptydów

o metoda mikrorozcieńczeń w bulionie

o metoda dyfuzji w agarze z paska nasączonego gradientem antybiotyku Do wykonania:

1. barwienie metodą Grama preparatu z hodowli Staphylococcus aureus 2. oznaczenie katalazy i czynnika CF