TESTY RÓŻNICUJĄCE (2h)
a) Różnicowanie szczepów syntetyzujących enzymy amylolityczne – podłoże agarowe ze skrobią wg Waksmana
• Do jałowego naczynia o pojemności 200 cm3 odważyć 10g mąki, dodać 90 cm3 jałowej wody i wymieszać dokładnie, tak aby nie było grudek (można posługiwać się pałeczką szklaną)
• Otrzymaną zawiesinę stale mieszając, ogrzewać w łaźni wodnej (850C, 10 min. )
• Wykonać posiew punktowy igłą na płytkę Petriego z podłożem Waksmana.
• Po inkubacji płytkę zalać płynem Lugola – wokół kolonii bakterii rozkładających skrobię będą widoczne jaśniejsze strefy podłoża, tam gdzie skrobia jest nie rozłożona, zabarwienie jest ciemnoniebieskie.
b) Różnicowanie szczepów syntetyzujących enzymy proteolityczne
• Dokładnie wymieszać 1g gleby w 100cm3 jałowej wody.
• Otrzymaną zawiesinę stale mieszając, ogrzewać w łaźni wodnej (850C, 10 min. )
• Wykonać posiew punktowy na dwie płytki Petriego (z agarem żelatynowym i mlecznym)
• Inkubować 7 dni w temperaturze pokojowej
• Po okresie inkubacji sprawdzić konsystencję podłoża żelatynowego oraz występowanie na płytkach kolonii wykazujących rozjaśnienie podłoża wywołane proteolizą; gdy jasne
strefy są trudno dostrzegalne należy zalać płytkę nasyconym roztworem (NH4)2SO4.
c) Różnicowanie bakterii z rodziny Enterobacteriaceae – podłoże Kliglera Pozwala na stwierdzenie zdolności fermentowania laktozy i glukozy z wytworzeniem gazu lub bez, a także produkcją siarkowodoru. Zmiany barwne w hodowli są następujące:
• żółty skos i żółty słupek wskazują na fermentację laktozy i glukozy (E. coli)
• niezmieniona barwa podłoża wskazuje na brak fermentacji obu cukrów (fot.1.1)
• czerwony skos i żółty słupek wskazują na fermentację glukozy, a brak fermentacji laktozy (Salmonella) (fot. 1.2)
• wytwarzanie siarkowodoru powoduje zaczernienie podłoża (fot.1.3 i 1.5)
• wytwarzanie gazu powoduje powstawanie pęcherzyków gazu wewnątrz agaru, niekiedy rozerwanie podłoża (Salmonella) (fot.1.4)
Fot.1. Różnicowanie Enterobacteriaceae na podłożu Kliglera (ź ródło: www.home.planet.nl) Technika szczepienia:
Igłą pobrać materiał z wybranej kolonii przez dotknięcie jej, następnie nakłuć część słupkową a potem rozprowadzić materiał po części skośnej.
Inkubować w temp. 37 0C, 24 h.
d) Różnicowanie bakterii kwaszących – zmodyfikowane podłoże Blickfeldta z węglanem wapniowym
• Wykonać posiew (0.5 cm3) próbki piwa i wina na płytki z podłożem Blickfeldta
• Po okresie inkubacji ocenić obecność stref przejaśnienia – świadczących o obecności bakterii kwaszących
• Zróżnicować bakterie mlekowe i octowe – test na obecność katalazy (umieścić na szkiełku podstawowym kroplę soli fizjologicznej, następnie pobrać badaną kolonię
bakteryjną i rozetrzeć w płynie fizjologicznym. Do tak uzyskanej zawiesiny dodać 1-2
krople 3% wodnego roztworu nadtlenku wodoru. Gdy bakterie wytwarzają katalazę,
wydzielają się pęcherzyki tlenu fot.2)
Bakterie mlekowe – K-
Bakterie octowe- K+
Fot. 2. Pozytywny wynik testu na obecność katalazy (ź ródło: www.nugi-zentrum.de)
Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania w zeszycie ćwiczeniowym
Literatura:
1. Duszkiewicz – Reinhard W., Grzybowski R., Sobczak E.: Teoria i ćwiczenia z
mikrobiologii ogólnej i technicznej, Wyd. SGGW, W-wa 1993.
2. Grabińska – Łoniewska A.: Ćwiczenia laboratoryjne z mikrobiologii ogólnej, Wyd. PW, W-wa 1999.
3. Szostak – Kotowa J.: Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej i przemysłowej, Wyd. AE, Kraków 2002.
4. Bednarski W., Reps A.: Biotechnologia żywności, WNT, W-wa 2003.
5. Libudzisz Z., Kowal K.: Mikrobiologia techniczna (tom I i II) Wyd. PŁ, Łódź 2000.