The dynamic progress In the pharmaceutical microbiology has Bern 

observed during the last several years. In the place of traditional manual 
assays, thy modern alternative methods, already implemented and accep-
ted in the clinical microbiology, the food microbiology or cosmetic industry, 
were introduced into pharmacy. Today, there is impossible to imagine the 
laboratory without the modern equipment which not only makes research 
easy but also permits to obtain reliable and repeatable results and help 
to improve for better identification of microorganisms. The development of 
computer techniques contributed to creating new systems for the identi-
fication of microbes which is updated with taxonomical changes. Actually 
lines of the tubes is replaced by automatized analyzers: Vitek Compact, 
BD Phoenix, MicroScan WalkAway 40 which enable the identification of 
the microbes during several times shorter than till now this was possible. 
Methods recommended by normative documents, both qualitative as well 
as quantitative, are based on microorganisms cultivation. Excellent solution 
was the connection of the traditional methods with modern techniques of 
performance and then the detection of microorganisms. The application 
of the new technique, the spiral plate method in quantitative research, 
eliminates the necessity of repeated dilutions of the test-sample – the stage 
with the greatest error, and the connection with computer analysis con-
siderably accelerates the obtainment of the result. 

Other manner of microbes number qualification is the impedi-

metric method, based on changes of electrical properties of the mi-
crobiological medium during microbial growth. The bioluminescence 
method, connected with the detection of ATP presence in cells, assist 
with computer analysis using Miliflex Rapid System, permits for quick 
detection of slow growing bioburden. 

Determination of the number of microbes need not only be based 

on cultivation methods. The immediate calculation of microbes makes 
possible with flow and solid phase cytometry applied in BD Liquid 
Counting Beads or Sysmex UF-100 apparatuses. This method uses dyes 
which in the different degree penetrate into live and dead cells what 
allows for determination of the total cell number as well as differen-
tiation between viable and dead cells. The changes of the conservative 
position concerning alternative methods presented in pharmacopoeia 
was an answer on the application of the pharmaceutical industry.

Pharmaceutical 
microbiology

– tradition 

and modernity

W ciągu ostatnich kilku lat obserwuje się dynamiczny postęp 

w mikrobiologii farmaceutycznej. W miejsce dotychczas stosowanych 
tradycyjnych,  manualnych metod badawczych wprowadzane są 
nowoczesne,  alternatywne techniki, które już zostały wdrożone 
– czy to w mikrobiologii klinicznej, mikrobiologii żywności czy 
w przemyśle kosmetycznym. Dzisiaj już trudno wyobrazić sobie 
funkcjonowanie laboratorium bez nowoczesnej aparatury, która 
nie tylko ułatwia przeprowadzenie badania czy pozwala uzyskać 
w pełni  wiarygodne i powtarzalne wyniki w krótszym czasie, 
ale przede wszystkim stale przyczynia się do lepszego poznawania 
drobnoustrojów. Rozwój technik komputerowych przyczynił się do 
opracowania nowych systemów do identyfikacji drobnoustrojów, 
które nie pozostają w tyle za zmianami taksonomicznymi. Obecnie 
szeregi probówek zostały zastąpione przez zautomatyzowane ana-
lizatory: Vitek Compact, BD Phoenix, MicroScan WalkAway 40, 
które umożliwiają identyfikację drobnoustroju w czasie kilkakrotnie 
krótszym niż dotychczas. Metody rekomendowane przez klasyczne 
opracowania normatywne są metodami hodowlanymi; dotyczy 
to zarówno metod jakościowych, jak i ilościowych. Doskonałym 
rozwiązaniem było połączenie tradycji z nowoczesną techniką wy-
konania, a następnie detekcji. Użycie techniki posiewu spiralnego 
w badaniach ilościowych wyeliminowało konieczność wielokrotnego 
rozcieńczania próby – etapu obarczonego największym błędem 
– a połączenie jej z urządzeniem do komputerowej analizy obrazu 
znacznie przyspieszyło uzyskanie wyniku. 

Innym sposobem określenia liczby drobnoustrojów jest wykorzy-

stanie metody opierającej się na zmianach właściwości elektrycznych 
pożywki mikrobiologicznej w trakcie wzrostu drobnoustrojów. 
Impedymetria znalazła szerokie zastosowanie w badaniach, w któ-
rych wykorzystywane są drobnoustroje o znanej kinetyce wzrostu. 
Rozwiązaniem pozwalającym na wykrywanie drobnoustrojów wolno 
namnażających się stało się połączenie techniki filtracji – jednej z me-
tod referencyjnych – z wykrywaniem ATP, obecnego w zdolnych do 
życia komórkach drobnoustrojów, oraz komputerową analizą obrazu 
w zestawie Miliflex Rapid System. 

Oznaczanie liczby drobnoustrojów nie musi opierać się jedynie na 

metodach hodowlanych. Możliwe jest bezpośrednie liczenie drobno-
ustrojów w cytometrach zarówno przepływowych, jak i na fazie stałej, 
takich jak BD Liquid Counting Beads czy Sysmex UF-100. Dzięki 
zastosowaniu barwników, które w różnym stopniu przenikają do 
wnętrza żywych i martwych komórek, możliwe jest nie tylko określenie 
ogólnej liczby drobnoustrojów, ale także ich różnicowanie. Zmiana 
konserwatywnego stanowiska w opracowaniach farmakopealnych 
w zakresie stosowanych metod była odpowiedzią na zapotrzebowanie 
przemysłu farmaceutycznego.

Mikrobiologia 
farmaceutyczna

– tradycja 

i nowoczesność

oprac. dr Tomasz Zaręba

Narodowy Instytut Zdrowia Publicznego

Laboratorium | 

6

/2006

58

english in your laboratory | 

pharmaceutical microbiology ...