Pytania z egzaminu kultury tkankowe zwierząt 2013

Gr. 1

1. Podstawowe typy hodowli in vitro

2. Sterylizacja szkła i plastiku

3. Identyfikacja martwych Komorek w hodowlach

4. Jak selekcjonujemy komórki w hodowlach in vitro

5. Jak izolujemy komórki żeby uzyskać pojedyncze komórki w hodowli

6. Definicja( life span, linia komórkowa, konfluencja, podłoże zdefiniowane)

7. Testowe, co nie charakteryzuje transformowanych komórek nowotworowych

8. Krótka charakterystyka hodowli eksplantów

9. Izolacja i hodowla in vitro Komorek nerwowych ( z ćwiczeń)

Gr. 2

1. Co to jest hodowla in vitro

2. Jakie jest odpowiednie pH w pożywce i jak je uzyskać

3. Opisać hodowlę aorty szczura

4. Definicje

a) inoculum,

b) pożywka niezdefiniowana,

c) hodowla pierwotne,

d) proliferacja, adhezja? Coś takiego ale nie pamiętam…

5. Metody wyprowadzania lini komórkowych

6. Metody transfekcji wymienić

7. Sterylizacja pożywki, jak to zrobić

8. Testowe ; coś o lini komórkowych o określonym czasie życia, co jej nie definiuje

1. lifespan,

2. profilferacja,

3. mogą ale nie muszą się przyłączyć do podłoża i migrować

Metody określania proliferacji komórek?

• W mikroskopie odwróconym

• Na podstawie koloru pożywki

Jak sterylizować plastik?

Plastik sterylizujemy w autoklawie po uprzednim dokładnym umyciu i zapakowaniu do specjalnego opakowania.

Dlaczego nie autoklawujemy pożywek zwierzęcych?

Zawierają białka i inne różne składniki, które pod wpływem wysokiej temp. mogą ulec rozpadowi, stracić aktywność.

Co to PBS?

PBS (roztwór soli fizjologicznej) jest roztworem wodnym zawierającym w swoim składzie chlorek sodu i fosforan sodu. Czasem może zawierać dodatkowo chlorek potasu oraz fosforan potasu. Bufor pozwala utrzymać stałe pH. Ma izotoniczny charakter oraz nie wykazuje toksyczności dla żywych komórek, więc jest buforem powszechnie wykorzystywanym w wielu analizach.

Jak hamujemy działanie trypsyny a jak kolagenazy i DNAzy?

Trypsynę surowicą, a kolagenazę i DNAzę poprzez wirowanie.

Metodyka barwienia ORO i jak działa?

Barwnik ORO wybarwia kropelki lipidów w cytoplazmie komórek i dzięki temu można wykryć ich obecność w komórkach.

Metoda Bradforda służy do oznaczania stężenia białka. Procedura oznaczania stężenia polega na tworzeniu kompleksu barwnik białko. Kompleks ten powoduje przesunięcie długości fali odpowiadającej max absorpcji barwnika z 465 do 595. Absorbancja jest wprost proporcjonalna do stężenia białka.

Jak izolujemy komórki żeby uzyskać pojedyncze komórki w hodowli?

narząd/tkanka--> rozdrobnienie mechaniczne i izolacja enzymatyczna komórek--> odwirowanie komórek i zawieszenie w pożywce--> wysianie inokulum--> adhezja komórek--> identyfikacja

Co to znaczy że komórki są heterogenne?

To znaczy że są mieszaniną populacji.