Metody badań 
mikroskopowy
ch

FISH 

Fluorescencyjna hybrydyzacja jest 
techniką służącą do wykrywania w 
badanym materiale genetycznym 
określonej sekwencji DNA za pomocą 
fluorescencyjnych sond DNA. W celu 
analizy badanego materiału konieczne jest 
użycie mikroskopii fluorescencyjnej. 
Technika FISH może być wykorzystana do 
badania wielu typów komórek i tkanek. 

Najczęściej odpowiednie 
przygotowanie komórek do badania 
polega na usunięciu cytoplazmy i 
utrwaleniu jąder komórkowych na 
szkiełku podstawowym. 
Fluorescencyjna sonda jest nanoszona 
na preparat i całość podawana jest 
krótkotrwałej denaturacji w 
podwyższonej temperaturze, a 
następnie kilkugodzinnej 
hybrydyzacji. Kolejnym etapem jest 
usunięcie nadmiaru 
niezhybrydyzowanej sondy przez 
kilkukrotne odpłukanie preparatu i 
uwidocznienie jąder komórkowych 
barwnikiem specyficznym dla DNA. 
Tak przygotowany preparat można 
analizować pod mikroskopem 
fluorescencyjnym

Dapi

Organiczny związek chemiczny, stosowany 
jako barwnik fluorescencyjny silnie wiążący się do DNA. 
Powszechnie używany do wybarwiania jąder 
komórkowych lub chromosomów w mikroskopii 
fluorescencyjnej.  Ponieważ DAPI przenika przez 
nienaruszone błony biologiczne, może być używany do 
wybarwiania zarówno żywych komórek jak i utrwalonych. 
W mikroskopii fluorescencyjnej DAPI jest wzbudzany 
światłem ultrafioletowym. Ponieważ DAPI wiążę się bardzo 
ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym zaburza 
jego strukturę, związek ten jest toksyczny i mutagenny. 
Przy pracy z DAPI powinno się zachować szczególną 
ostrożność.

Dapi

SYBR Green

Jest barwnikiem fluorescencyjnym . 
Niezwiązany SYBR Green po wzbudzeniu 
emituje słabą fluorescencję, której 
intensywność zostaje zwiększona o kilka 
rzędów wielkości po związaniu się 
barwnika z dwuniciowym DNA.