Żywność GMO

- metody

wykrywania

Dr inż. Wojciech Sawicki

Katedra Mikrobiologii Żywności,

Akademia Rolnicza w Szczecinie

Ustawa o organizmach genetycznie
zmodyfikowanych.
(Dz.U. 2001 nr 76 poz. 811)

organizm genetycznie zmodyfikowany

organizm genetycznie zmodyfikowany – organizm inny niż

organizm człowieka, w którym materiał genetyczny został
zmieniony w sposób niezachodzący w warunkach
naturalnych wskutek krzyżowania lub naturalnej
rekombinacji, w szczególności przy zastosowaniu:

a) technik rekombinacji DNA z użyciem wektorów, w tym

tworzenia materiału genetycznego poprzez włączenie do
wirusa, plazmidu lub każdego innego wektora cząsteczek
DNA wytworzonych poza organizmem i włączenie ich do
organizmu biorcy, w którym w warunkach naturalnych nie
występują, ale w którym są zdolne do ciągłego powielania,

b) technik stosujących bezpośrednie włączenie materiału

dziedzicznego przygotowanego poza organizmem, a w
szczególności: mikroiniekcji, makroiniekcji i
mikrokapsułkowania,

c) metod niewystępujących w przyrodzie dla połączenia

materiału genetycznego co najmniej dwóch różnych
komórek, gdzie w wyniku zastosowanej procedury powstaje
nowa komórka zdolna do przekazywania swego materiału
genetycznego odmiennego od materiału wyjściowego
komórkom potomnym,

Art. 3. ust. 2

Rozporządzenie (WE) nr 1829/2003
Parlamentu Europejskiego i Rady z dnia 22
września 2003 r.
w sprawie genetycznie zmodyfikowanej
żywności i paszy

Art. 2.
6) "genetycznie zmodyfikowana żywność" oznacza

żywność zawierającą, składającą się lub
wyprodukowaną z GMO;

8) "genetycznie zmodyfikowany organizm do użytku

spożywczego" oznacza GMO, który może być użyty,
jako żywność lub materiał źródłowy do produkcji
żywności;

10) "wyprodukowane z GMO" oznacza uzyskane w całości

lub w części z GMO, ale niezawierające lub
nieskładające się z GMO;

Uprawy GMO 2005-2007

Od DNA do GMO…

1953

Opisanie struktury DNA

1968

Enzymatyczne metody przecinania lub łączenia DNA

lub gen

(restryktazy

i ligazy), celem uzyskania

rekombinacyjnego DNA

1973

Metody transferu gen

w/DNA do kom

rek

1990

Pierwsza Dyrektywa UE dotycząca żywności GM

1994

Komercjalizacja w USA pierwszego produktu GM

(pomidora)

1995

Opisanie genomu pierwszego organizmu

Haemophilus influenz

1996

Drożdże piekarskie

Saccharomyces cerevisiae

pierwszy genom Eucaryota

2000

Opisanie około 40 genom

2001

Opisanie genomu człowieka

2002

Projekty Dyrektyw UE dotyczących zatwierdzania,

oceny bezpieczeństwa, wykrywalności i oznakowania

żywności GM

Inżynieria

genetyczna

To celowa ingerencja w organizm, która

polega na wprowadzeniu do genomu żywego

organizmu nowych informacji genetycznych,

czyli przenoszeniu genów z jednego organizmu

do innego, bądź na zmodyfikowaniu genomu

poprzez izolowanie lub eliminację genów.

Zakres manipulacji

genetycznych

Wyróżniamy trzy rodzaje

metod modyfikacji

genetycznych,

pozwalających uzyskać

pożądane cechy.

Zakres manipulacji

genetycznych

Zmieniona zostaje aktywność genów

naturalnie występujących w danym

organizmie.

Metoda ta została wykorzystana w produkcji pomidorów

Flavr Savr, które jako pierwsze GMO zostały w

1994 roku dopuszczone do obrotu w USA. Zmniejszono w

nich aktywność genu, który odpowiada za proces

dojrzewania i mięknięcia pomidora. Otrzymano odmianę

zmienioną genetycznie, choć w komórkach

rośliny nie pojawił się żaden nowy element, żaden obcy

gen.

Zakres manipulacji

genetycznych

Do organizmu wprowadzone zostają

dodatkowe kopie jego własnych genów.

Powielenie genu - powoduje "namnażanie" pożądanej

cechy (barwa, zawartość cukru).

Dotychczas nie wprowadzono do obrotu takich

produktów.

Zakres manipulacji

genetycznych

Wprowadzony gen pochodzi z

organizmu innego gatunku.

Włączenie materiału genetycznego (DNA) do genomu

innych organizmów roślin lub zwierząt, niezależnie od

gatunku. Najbardziej powszechne zastosowanie tego

rodzaju modyfikacji to przeniesienie genu z bakterii

glebowej

Bacillus thuringensis

do roślin uprawnych.

Dzięki temu wytwarzają one toksynę chroniącą je

przed owadami. Tak zmodyfikowane rośliny zostały

wprowadzone do obrotu.

Inżynieria

genetyczna

Dotychczas

najszersze

Dotychczas

najszersze

zastosowanie inżynieria genetyczna

osiągnęła

polu

produkcji

osiągnęła

polu

produkcji

żywności.

GMO - przykłady

Pierwszą

zmodyfikowaną

genetycznie

Pierwszą

zmodyfikowaną

genetycznie

rośliną był tytoń – 1984 rok.

roku

1986

modyfikacji

poddano

roku

1986

modyfikacji

poddano

pomidora.

Od tego czasu zmodyfikowana została już

większość roślin mających znaczenie

gospodarcze.

GMO - przykłady

Organizm

Nowa cecha

Zastosowanie w

żywności

Kukurydza

Tolerancja na owady i

herbicydy

Produkty żywnościowe i ich

składniki

Soja

Tolerancja na herbicydy

Produkty żywnościowe i ich

składniki

Kukurydza

Odporność na owady

Składniki żywności

Kukurydza

Odporność na herbicydy

Składniki żywności

Pomidor

źnione dojrzewanie

Przetwory pomidorowe

Cykoria (czerwona

–

radicchio oraz

zielona)

Tolerancja na herbicydy i

męska sterylność

Warzywo

Soja

Wysoka zawartość kwasu

oleinowego

Olej

Kukurydza

Tolerancja na herbicydy

Produkty żywnościowe i ich

składniki

Soja

Tolerancja na herbicydy

Nasiona

Kukurydza

Tolerancja na herbicydy i

owady

Warzywo, mrożona słodka

kukurydza

i sproszkowana,

składniki żywności

Burak cukrowy

Tolerancja na herbicydy

Cukier, z pulpy - składniki

żywności

Burak pastewny

Tolerancja na herbicydy

Pasza dla zwierząt

Ziemniak

Zmieniony skład skrobi

Skrobia i składniki

Bawełna

Tolerancja na herbicydy lub

owady

Zastosowanie tak jak inna

bawełna

Celem modyfikacji

organizmów jest:

uodpornienie ich na działanie niekorzystnych

warunków, np. mróz, suszę lub zasoloną

glebę

Odporność na niekorzystne warunki środowiska pozwala uprawiać

rośliny na terenach gdzie wcześniej uprawa nie była możliwa.

Dzięki modyfikacjom są one bardziej odporne na zasolenie

gleby, suszę, mróz, czy zanieczyszczenie metalami ciężkimi.

Tworząc rośliny akumulujące metale ciężkie próbuje się

oczyszczać glebę z tych zanieczyszczeń (fitoremediacja

uodpornienie

roślin

owady

żerujące

uodpornienie

roślin

owady

żerujące

najczęściej na liściach, zarówno w stadium

dorosłym - imago, jak i larwalnym

Odporność na szkodniki – modyfikacja Bt. Wprowadza się geny z

bakterii glebowej Bacillus thuringensis, odpowiedzialne za

produkcję toksycznego białka (Cry) dla owadów-szkodników. Gdy

szkodnik zje fragment rośliny to zginie. Białko Cry jest toksyczne

tylko dla określonych gatunków owadów, nie jest toksyczna dla

np. człowieka, innych ssaków, czy ptaków, gadów, płazów, itd. –

związane jest to z występowaniem specyficznych receptorów dla

białka Cry w przewodzie pokarmowym owadów, jak i

zasadowego pH. Tak modyfikowana jest głównie kukurydza i

bawełna, także ziemniaki przeciw stonce.

Celem modyfikacji

organizmów jest:

uodpornienie ich na działanie niekorzystnych

warunków, np. mróz, suszę lub zasoloną glebę

Odporność na herbicydy – najpowszechniejsza modyfikacja (gł.

soja i rzepak), pozwala na stosowanie herbicydu (środka

chwastobójczego) bez obawy o zniszczenie uprawianych

roślin. Giną wtedy chwasty, przeżywają rośliny uprawne. Do

rośliny wprowadzany jest gen, który odpowiada za produkcję

enzymu rozkładającego dany herbicyd (gł. glifosat). Często

koncerny biotechnologiczne oferują ‘w komplecie’ dany

herbicyd i roślinę transgeniczną na niego odporną.

Celem modyfikacji

organizmów jest:

poprawa właściwości odżywczych.

W celu eliminacji niedobory witaminy A u azjatyckich
dzieci został stworzony Golden Rice – Złoty ryż. Dzięki
genom z żonkila zawierał on bata-karoten, który jest
prekursorem witaminy A. Efektem ubocznym
modyfikacji jest jego złocista barwa, która wielu się
podoba ;)

Celem modyfikacji

organizmów jest:

•

Conventional and golden rice

Modyfikuje się także rośliny ozdobne dla intensywniejszej barwy
(szybsze niż tradycyjna selekcja). Truskawki aby było
odporniejsze na przymrozki. Winogrona bez pestek. Mniejsze
wymiary główek kapusty. „Słodkie ziemniaki" - wprowadzenie
genu odpowiedzialnego za wytwarzanie słodkiego białka –
taumatyny (podobnie powstał „słodki ogórek”). Bardziej kruchy
seler. Itd.

Celem modyfikacji

organizmów jest:

•

Limburgerhof, Germany.

Celem modyfikacji

organizmów jest:

opóźnienie dojrzewania co ułatwia

przechowywanie i transport

Pomidor transgeniczny Flavr Savr w 1994 roku był pierwszym
GMO wprowadzonym do obrotu. Modyfikacja genetyczna
pomidora Flavr Savr polegała na zmniejszeniu w nim aktywność
genu, który odpowiada za proces dojrzewania i mięknięcia
pomidora. Tak zmodyfikowany pomidor lepiej znosił transport i
dłużej zachowywał świeżość.

Były to pomidory Flavr Savr, które zostały w 1994 r.
dopuszczone do sprzedaży w USA.

Do genomu tego pomidora został wprowadzony odwrócony gen
poligalakturonazy (PG) – enzymu rozkładającego ścianę
komókową. RNA powstałe po transkrypcji odwróconego genu
łączyło się komplementarnie z mRNA prawidłowego genu PG, co
uniemożliwiało przyłączenie się rybosomu, i w konsekwencji
syntezy enzymu. Ta metoda jest typu: antysensu (inhibicja
antysensowna).

Pomidor transgeniczny Flavr Savr - pierwsze GMO

wprowadzone do obrotu

Inna metoda polega na wprowadzaniu nie odwróconego genu PG,
ale krótszego niż prawidłowy - także hamuje syntezę PG - jest to
inhibicja sensowna.

Obecnie już 80% z 10.000 odmian pomidora występującego na
świecie było modyfikowanych genetycznie.

Celem innych modyfikacji genetycznych pomidorów jest
zwiększenie suchej masy, poprawa barwy, poprawia smaku,
odporność na herbicydy (środki chwastobójcze), odporności na
szkodniki, a także zwiększenie odporności na niekorzystne
warunki środowiskowe, np. pomidory rosną na silnie zasolonych
glebach.

Żywność Modyfikowana

Genetycznie

Genetycznie Modyfikowana Żywność to

żywność:



zawierająca GMO,



składająca się z GMO lub



wytworzona z GMO

(

Rozporządzenie (WE) 1829/2003 Parlamentu Europejskiego i Rady z dnia 22

września 2003 roku w sprawie genetycznie zmodyfikowanej żywności i

środków żywienia zwierząt

)

W pracach genetycznych

prowadzonych w celu uzyskania

żywności transgenicznej dominują

trzy kierunki:

Wzbogacenie żywności w składniki

podnoszące jej wartość żywieniową

Usuwanie substancji szkodliwych

i niepożądanych

Poprawa cech funkcjonalnych

związanych z procesami

przetwórczymi

Gdzie i co się

uprawia?

•

Obecnie w Unii Europejskiej, w tym

także w Polsce, stosować

można jako żywność lub

składniki żywności zmodyfikowaną

genetycznie

soję,

kukurydzę,

genetycznie

soję,

kukurydzę,

rzepak (ściśle określone

linie).

Traceability

Polskie przepisy

zobowiązują

etykietowania

żywności

i pełnej

informacji

o modyfikacjach.

http://www.biotechnolo

g.pl/

Znakowanie i

identyfikowalność

produktów GMO

Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady

Europy nr 1829/2003

z dnia 22 września 2003 roku

w sprawie genetycznie zmodyfikowanej

żywności i środków żywienia zwierząt

nakłada na producentów obowiązek znakowania

żywności, jeśli udział składnika wywodzącego się z

organizmów

modyfikowanych

genetycznie

organizmów

modyfikowanych

genetycznie

środku spożywczym przekracza 0,9%

tego składnika w produkcie.

Znakowanie i

identyfikowalność

produktów GMO

kwietniu

2004

roku

Unia

kwietniu

2004

roku

Unia

Europejska

wprowadziła

ścisłe

Europejska

wprowadziła

ścisłe

zasady dotyczące odpowiedniego

znakowania produktów.

Opakowanie

wymaga

Opakowanie

wymaga

odpowiedniego oznakowania, jeśli

produkt zawiera więcej niż 0,9%

składników

modyfikowanych

składników

modyfikowanych

genetycznie.

Jeśli

składniki

oczekują

Jeśli

składniki

oczekują

końcową akceptację, wskaźnik ten

obniża się do 0,5%.

http://www.wszpwn.com.pl/default.asp?section=KLUB&ID=1963

Zgodnie z art. 47 ustawy o

organizmach genetycznie

zmodyfikowanych oznakowanie

produktu GMO powinno zawierać

następujące informacje:

nazwę produktu GMO i nazwy zawartych

w nim GMO,

imię i nazwisko lub nazwę producenta

lub importera oraz adres,

przewidywany

obszar

stosowania

przewidywany

obszar

stosowania

produktu GMO: przemysł, rolnictwo,

leśnictwo,

powszechne

użytkowanie

leśnictwo,

powszechne

użytkowanie

przez

konsumentów

lub

inne

przez

konsumentów

lub

inne

specjalistyczne zastosowanie,

Zgodnie z art. 47 ustawy o

organizmach genetycznie

zmodyfikowanych oznakowanie

produktu GMO powinno zawierać

następujące informacje:

zastosowanie produktu GMO i dokładne warunki

użytkowania wraz z informacją, w uzasadnionych

przypadkach, o rodzaju środowiska, dla którego

produkt jest odpowiedni,

szczególne wymagania dotyczące magazynowania

i transportu, jeżeli zostały określone w

zezwoleniu,

informacje o różnicy wartości użytkowej,

między produktem GMO, a jego tradycyjnym

odpowiednikiem,

Znakowanie i

identyfikowalność

produktów GMO

W przypadku gdy cały produkt jest

genetycznie zmodyfikowany oznakowanie

powinno być uzupełnione informacją:

produkt genetycznie zmodyfikowany.

Jeśli

tylko

niektóre

składniki

są

Jeśli

tylko

niektóre

składniki

są

genetycznie zmodyfikowane, obok nazwy

składnika

należy

umieścić

napis:

składnika

należy

umieścić

napis:

genetycznie zmodyfikowany.

Napis i informacja powinny być czytelne

i zapisane czcionką tej samej

wielkości co nazwa składnika

lub produktu.

KONTROLA ŻYWNOŚCI

GM W POLSCE

Kontrolę nad przestrzeganiem przepisów

aktów prawnych z zakresu żywności GM

sprawują:

1) Ministerstwo Środowiska

2) Państwowa Inspekcja Sanitarna,

3) Inspekcja Ochrony Roślin i Nasiennictwa,

4) Inspekcja Ochrony Środowiska,

5) Inspekcja Weterynaryjna,

6) Inspekcja Handlowa,

7) Państwowa Inspekcja Pracy,

8) organy administracji celnej w zakresie kontroli legalnego

obrotu GMO,

9) Inspekcja Jakości Handlowej Artykułów Rolno-

Spożywczych.

KONTROLA

ŻYWNOŚCI GM W

POLSCE i UE

WSPÓLNOTOWY REJESTR GENETYCZNIE ZMODYFIKOWANEJ

ŻYWNOŚCI I PASZ

Rozporządzenie 1829/2003

jest podstawą prawą

do prowadzenia 'Wspólnotowego Rejestru genetycznie

zmodyfikowanej żywności i pasz’. Rejestr administrowany

jest przez Komisję Europejską i ma formę elektroniczną.

http://europa.eu.int/comm/food/dyna/gm_register/index_en.

cfm

Wykrywanie GMO

Przedstawione protokoły bazują na metodzie PCR i
pozwalają na screening GMO (stosując promotor 35S i
terminator nos) oraz wykrywanie specyficznych GMO (soi
Roundup Ready®, kukurydzy MON810 i kukurydzy Bt-176)
w nieprzetworzonym i przetworzonym materiale,
przez porównanie z odpowiednimi
niezmodyfikowanym genetycznie próbkami (soi i
kukurydzy).
Przedstawione metody pozwalają tylko na uzyskanie
wyniku jakościowego wskazując na obecność/nieobecność
poszukiwanych sekwencji w próbce.

PCR specyficzny dla

roślinnego DNA: soja-

lektyna

Identyfikacja DNA soi jest przeprowadzana poprzez
znalezienie genu lektyny.
Reakcja PCR z zastosowaniem starterów
GM03/GM04 stwierdza, czy w próbce znajduje się
możliwe do powielenia DNA soi.

Kontrole

W każdej analizie bardzo ważne jest przeprowadzanie

eksperymentów kontrolnych. Kontrole negatywne są

zaprojektowane w celu sprawdzenia czy odczynniki użyte do

reakcji PCR nie są zanieczyszczone przez DNA. Kontrole

pozytywne zawierające scharakteryzowane próbki są również

konieczne w celu sprawdzenia efektywności i specyficzności

reakcji PCR.

Do analizy przeprowadzanej przy użyciu PCR muszą być dołączone

następujące kontrole:

Kontrola pozytywna

: czyste DNA, wyizolowane z konwencjonalnej soi

Kontrola negatywna

: czyste DNA, wyizolowane z innego gatunku, nie

zawierającego genu lektyny

Kontrola bez matrycy

: kontrola negatywna Mastermixu, w której

zamiast DNA użyta jest woda

Program PCR

Interpretacja wyników

Para starterów GM03/GM04 stosowana do wykrycia natywnego

dla soi genu lektyny jest używana w tym przypadku jako

system kontrolny. Specyficzny dla lektyny prążek o wielkości

118 pz potwierdza, że wyizolowane DNA jest odpowiedniej

jakości do amplifikacji. W kontroli pozytywnej powielany będzie

fragment o wielkości 118 pz. Kontrola negatywna i kontrola

bez matrycy nie powinny dawać żadnych widocznych prążków.

Jeśli pozytywne/negatywne kontrole nie dają oczekiwanych

wyników, cała analiza PCR wszystkich próbek jest nieważna.

Jeśli kontrole dają oczekiwane wyniki, a próbka nie daje prążka o

wielkości 118 pz, oznacza to, że próbka ta nie zawiera DNA soi,

które można powielić.

PCR specyficzny dla

roślinnego DNA: kukurydza-

ze/na

Identyfikacja DNA kukurydzy jest przeprowadzana
poprzez znalezienie genu zeiny. Reakcja PCR z
zastosowaniem starterów ZEIN3/ZEIN4 stwierdza czy w
próbce znajduje się możliwe do powielenia DNA
kukurydzy.

Charakterystyka starterów ZEIN3 i ZEIN4

Program PCR

Interpretacja wyników

Para starterów ZEIN3/ZEIN4 stosowana do wykrycia
natywnego genu zeiny jest używana w tym przypadku
jako system kontrolny w celu potwierdzenia, że
wyizolowane DNA jest odpowiedniej jakości do
amplifikacji. Jeśli wyizolowane DNA jest jakości
odpowiedniej do amplifikacji, na żelu będzie widoczny
specyficzny dla genu zeiny prążek o wielkości 227 pz. W
kontroli pozytywnej powielany będzie również fragment o
wielkości 227 pz. Kontrola negatywna i bez matrycy nie
powinny dawać żadnych widocznych prążków.
Jeśli pozytywne/negatywne kontrole nie dają
oczekiwanych wyników, cała analiza PCR wszystkich
próbek jest nieważna.
Jeśli kontrole dają oczekiwane wyniki, a próbka nie daje
prążka o wielkości 227 pz, oznacza to, że próbka ta nie
zawiera DNA kukurydzy, które można by powielić.

Metoda screeningowa pozwalająca na

wykrycie Genetycznie Zmodyfikowanych

Roślin

Geny   znajdują  się   pod   kontrolą  promotorów   i
terminatorów.   Najczęściej   używanym promotorem w
celu regulacji ekspresji transgenu jest promotor 35S
(pochodzący z CaMV) i terminator nos (pochodzący z
Agrobacterium tumefaciens). Zidentyfikowanie jednej z
tych  sekwencji regulatorowych w próbce zawierającej
soję i/lub kukurydze wskazuje na obecność  GMO.
W soi Roundup Ready® możliwa jest identyfikacja
zarówno promotora 35S jak i terminatora nos, w
przypadku kukurydzy tylko promotor 35S jest obecny w
liniach Bt-176 i MON810.

Promotor 35S

Interpretacja wyników

Para starterów p35S-cf3/p35S-cr4 jest używana do wykrywania

promotora 35S CaMV i amplifikuje fragment o wielkości 123

pz. Ten promotor reguluje ekspresję wielu roślin

transgenicznych takich jak soja Roundup Ready® i kukurydza

Bt-176.

W kontroli pozytywnej powielany będzie fragment o wielkości 123

pz. Kontrola negatywna i kontrola bez matrycy nie powinny

dawać żadnych widocznych prążków. Jeśli

pozytywne/negatywne kontrole nie dają oczekiwanych

wyników, cała analiza PCR wszystkich próbek jest

nieważna. Jeśli kontrole dają oczekiwane wyniki, a próbka

prążek o wielkości 123 pz, oznacza to, że próbka ta zawiera

zmodyfikowane DNA.

Terminator nos

Interpretacja wyników

Para starterów HA-nos118-f/HA-nos118-r jest używana do

wykrywania terminatora nos i amplifikuje fragment o
wielkości 118 pz. Ten terminator jest obecny w soi
Roundup Ready® i innych liniach roślin
transgenicznych (np. kukurydzy Bt-11) W kontroli
pozytywnej powielany będzie fragment o wielkości 118
pz. Kontrola negatywna i bez matrycy nie powinny
dawać żadnych widocznych prążków. Jeśli
pozytywne/negatywne kontrole nie dają
oczekiwanych wyników, cała analiza PCR
wszystkich próbek jest nie ważna.

Jeśli kontrole dają oczekiwane wyniki a próbka prążek o

wielkości 118 pz oznacza to, że próbka ta zawiera
zmodyfikowane DNA.

Możliwości

zastosowania technik

PCR w identyfikacji

zafałszowań żywności

Dr inż. Wojciech Sawicki

Katedra Mikrobiologii Żywności,

Akademia Rolnicza w Szczecinie

Wykrywanie mleka krowiego i koziego w

serach owczych (

oscypek

) przy

zastosowaniu techniki PCR (

polymerase

chain reaction

)

Środek spożywczy jest sfałszowany,

jeżeli jego skład lub inne właściwości

zostały zmienione bez poinformowania

o tym konsumenta, a także gdy

wprowadzone zostały do niego zmiany

mające na celu ukrycie jego

rzeczywistego składu lub innych

właściwości

•

Ustawa z dnia 24 lipa 2002 o zmianie ustawy

o warunkach zdrowotnych żywności i żywienia

z 11 maja 2001

Przedmiot analizy stanowiły

Oscypki owcze

Sery wędzone kozie

Wszystkie produkty pochodziły od różnych

producentów i zostały zakupione w punktach

handlu detalicznego w rejonach górskich

Polski – Nowy Targ, Krynica, Szklarska Poręba,

w sezonie zimowym.



Genomic Mini AX Food

[A&A Biotechnology, Polska]

•

Standardowe protokoły izolacji

zostały
zmodyfikowane i przystosowane do
izolacji DNA z wyrobów mleczarskich

Izolację DNA wykonano przy użyciu

•

Startery pozwalające dokonać identyfikacji gatunkowej

wyrobów mleczarskich zaprojektowano na podstawie
sekwencji kodującej cytochrom b w mitochondrialnym DNA
oraz 12s i 16s w mitochondrialnym rRNA u poszczególnych
gatunków zwierząt. Przy projektowaniu starterów
skorzystano z sekwencji uzyskanych z GenBank

•

Sekwencje starterów przygotowano przy użyciu programu

Primer3

•

Wielkość produktu powinna wynosić:



Mleko krowie – 274 p.z.



Mleko owcze – 172 p.z.



Mleko kozie – 326 p.z.

Identyfikacja surowców mięsnych

techniką multipleks PCR

Optymalne stężenia substratów reakcji obliczono według
protokołu dziewięciu reakcji zaproponowanego przez
Taguchi i Wu, a zmodyfikowanego przez Cobba
i Clarkson’a.

Optymalizacja reakcji PCR:

Wyniki

Użyte startery cechowały się wysoką

specyficznością

•

M O Wł K M

•

M – Marker M100-500 MR71

•

O – Mleko owcze

•

Wł – Mleko krowie

•

K – Mleko kozie

•

M Wł K O 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

12 13 14 15 M

•

M – Marker M100-500 MR71 [DNA-Gdańsk]

•

O – Mleko owcze

•

Wł – Mleko krowie

•

K – Mleko kozie

•

1-15 – Produkty reakcji PCR

Wśród 60 przebadanych prób

oscypków,

w żadnym przypadku

nie stwierdzono

obecności mleka owczego

•

M – Marker M100-500 MR71 [DNA-Gdańsk]

•

O – Mleko owcze

•

Wł – Mleko krowie

•

K – Mleko kozie

•

1-6 – Produkty reakcji PCR

•

7- próba Kontrolna

•

M Wł O K 1 2 3 4 5 6

7 M

Wśród 30 przebadanych prób oscypków - mix,

(deklarowany skład mleko owcze + mleko

krowie lub mleko owcze + mleko kozie) w

żadnym przypadku

nie stwierdzono

obecności mleka owczego i koziego

Zastosowanie techniki PCR

w wykrywaniu niewłaściwych

surowców w produktach

mięsnych

Przedmiot analizy stanowiły

•

parówki drobiowe

•

parówki cielęce

•

wyroby masarskie ze strusia

Wszystkie produkty pochodziły od różnych producentów i zostały

zakupione w punktach handlu detalicznego.

Izolację DNA wykonano przy

użyciu:



Wizard ® Genomic DNA Purification KIT

[Promega, USA]



Genomic Mini AX Food

[A&A Biotechnology, Polska]

•

Standardowe protokoły izolacji zostały

zmodyfikowane i przystosowane do izolacji DNA z
wyrobów masarskich

Identyfikacja surowców

mięsnych techniką PCR

Startery pozwalające dokonać identyfikacji gatunkowej
surowców mięsnych zaprojektowano na podstawie
sekwencji kodującej cytochrom b w mitochondrialnym
DNA u poszczególnych gatunków zwierząt. Przy
projektowaniu starterów skorzystano z sekwencji
uzyskanych z GenBank
Sekwencje starterów przygotowano przy użyciu programu
Primer3

Wielkość produktu powinna wynosić:



Struś – 193 p.z.



Kurczak – 227 p.z.



Wołowina – 274 p.z.



Wieprzowina – 398 p.z.

Wykrywanie soji w surowcach

mięsnych techniką PCR

•

W celu wykrycia soji oraz soji GM posłużono się

następującymi starterami:



Le1, Le6 kodującymi sekwencje lektyny



RR01 i RR04 kodujące gen EPSPS

(5-enolpyruvyslhikimate-

3-phosphate sytethase)

charakterystyczny dla

modyfikowanej
genetycznie soji

•

Wielkość produktu powinna

wynosić:



Soja – 318 p.z.



Soja GM – 356 p.z.

Wyniki

Zaprojektowane startery cechowały się

wysoką specyficznością

•

M K WŁ WP

•

M – Marker M100-500

MR71

•

K – Kurczak

•

WŁ – Wołowina

•

WP – Wieprzowina

•

M – Marker M100-500 MR71 [DNA-Gdańsk]

O – Struś
S

– Soja modyfikowana genetycznie, z genem

EPSPS
S – Soja

Wśród 30 przebadanych prób parówek drobiowych,
stwierdzono w 15 przypadkach dodatek wieprzowiny,
natomiast w 7 próbach wykryto wołowinę.

M K WP WŁ 1 2 3 4 5

M K WP WŁ 6 7 8 9 10

W 28 przypadkach wykryto soję, nie wykryto zaś soji
modyfikowanej genetycznie

•

M S S

1 2 3 4 5 6 M

•

1 – 5 produkty reakcji PCR (S+, S

6 – produkt reakcji PCR (S-, S

•

M K WP WŁ 1 2 3 4 5

Analizie poddano 30 parówek cielęcych, we wszystkich
znajdował się dodatek mięsa wieprzowego.
W 4 przypadkach

nie stwierdzono

obecności mięsa

wołowego.

Analizie zostały poddane następujące wyroby masarskie ze
strusia:
> Frankfurterki (

)

> Serdelki (

)

W obu przypadkach stwierdzono obecność nie podanej w
składzie wieprzowiny i wołowiny

•

M O 1 2

•

M O WP 1 2 M O

WŁ 1 2

•

M – Marker M100-500 MR71

[DNA-Gdańsk]

O – Struś
WŁ – Wołowina /wzorzec, kontrola dodatnia/
WP – Wieprzowina /wzorzec, kontrola dodatnia/

Dziękuję za

uwagę…

http://www.ybsweb.co.jp

Document Outline

Slide 1
Slide 2
Slide 3
Slide 4
Slide 5
Slide 6
Slide 7
Slide 8
Slide 9
Slide 10
Slide 11
Slide 12
Slide 13
Slide 14
Slide 15
Slide 16
Slide 17
Slide 18
Slide 19
Slide 20
Slide 21
Slide 22
Slide 23
Slide 24
Slide 25
Slide 26
Slide 27
Slide 28
Slide 29
Slide 30
Slide 31
Slide 32
Slide 33
Slide 34
Slide 35
Slide 36
Slide 37
Slide 38
Slide 39
Slide 40
Slide 41
Slide 42
Slide 43
Slide 44
Slide 45
Slide 46
Slide 47
Slide 48
Slide 49
Slide 50
Slide 51
Slide 52
Slide 53
Slide 54
Slide 55
Slide 56
Slide 57
Slide 58
Slide 59
Slide 60
Slide 61
Slide 62
Slide 63
Slide 64
Slide 65
Slide 66
Slide 67