Badania kliniczne, serologiczne, molekularne

i histopatologiczne nad rolą

Helicobacter

pylori

Chlamydia pneumoniae

w tętniakach aorty

brzusznej oraz miażdżycy aorty i tętnic

biodrowych

Akademia Medyczna im. Ludwika Rydygiera w Bydgoszczy

Wojciech Zegarski

Bydgoszcz 2002

ROZPRAWA HABILITACYJNA

Miażdżyca jest wynikiem długotrwałego procesu zapalno-

immunologicznego, uszkadzającego komórki śródbłonka

pojawiającego się w ścianie naczyń w odpowiedzi na czynniki

szkodliwe.

Fatalne następstwa przewlekłego patologicznego procesu

ściany naczyń stanowią prawdziwą epidemię XX-XXI wieku.

Późne powikłania tego procesu rozpoczynającego się w

dzieciństwie manifestują się klinicznie w wieku średnim i

starszym oraz są przyczyną największego odsetka

wszystkich zgonów.

Miażdżyca stanowi problem medyczny i społeczny.

Znane czynniki ryzyka

miażdżycy

LDL



HDL



nadciśnienie

cukrzyca

podatność genetyczna

homocysteina

znane

przyczyny

60%

mała aktywność

fizyczna

nadwaga

palenie tytoniu

fibrynogen

wolne rodniki

~40%

pozostałe?

(bakterie, wirusy ... inne?)

Marshall i Warren 1983 od 1989 nazwa

H. pylori

. Gram(-)

mikroaerofilna bakteria spiralnego kształtu „S”.

Przyczyna większości zmian zapalnych błony śluzowej

żołądka. Zakażonych ~50 % populacji świata. Głównym

rezerwuwarem człowiek. Mechanizmy przenoszenia nie

zbadane dokładnie. Szczepy I Cag A(+) i II typy Cag A(-).

Taksonomicznie wyodrębniona w 1989. Patogen wyłącznie

dla człowieka. Kształt ziarnkowaty lub owalny. Wielkość

zależna od cyklu rozwojowego podczas obserwacji. Formy:

(ciałka

podstawowe)

zakaźne;

(ciałka

podstawowe)

zakaźne;

(ciałka

siateczkowate) niezakaźne. Wewnątrzkomórkowo. RB

rozmnaża się. Szczepy

C. pneumoniae

różnią się od

pozostałych serologicznie, ultrastrukturalnie, genetycznie.

Przeciwciała obecne w 40-50 % populacji. Zakażenia ostre

i przewlekłe (nosicielstwo).

Tętniak aorty

TAB



naczynia > 50%

w porównaniu do odcinka

powyżej



tętniaków 3-15 cm

12% ludzi tętniaki mnogie

Miażdżyca aorty

NAB

(Zespół Leriche’a)

10-30%

niedokrwienia

kończyn dolnych

Aorta prawidłowa (60 lat)

2,01 ± 0,51 cm

(7,0%)

(26,7%)

(23,0%)

(30,9%)

(12,3%)

wg Gloviczki

„

Choroby naczyń”

Noszczyk 1998 PZWL

Podczas realizacji pracy sformułowano

następujące

zagadnienia badawcze.

Czy DNA

C. pneumoniae

i DNA

H. pylori

występuje w

blaszkach miażdżycowych i fragmentach ściany aorty,

pochodzących z tętniaków aorty brzusznej i aort

zmienionych chorobowo w przebiegu niedrożności

miażdżycowej aortalno-biodrowej.

Czy istnieje związek pomiędzy obecnością DNA

bakteryjnego

C. pneumoniae

H. pylori

w badanych

fragmentach aorty brzusznej zmienionej chorobowo a

odpowiedzią humoralną ogólną swoistą wobec tych

antygenów w surowicy krwi.

Cel pracy

Czy i jaka różnica w odpowiedzi humoralnej wobec

antygenów

C. pneumoniae

H. pylori,

istnieje w grupie

chorych z tętniakiem aorty brzusznej i miażdżycową

niedrożnością aortalno-biodrową w porównaniu z grupą

kontrolną.

Czy uzyskane wyniki badań serologicznych w kierunku

H. pylori

C. pneumoniae

mogą mieć znaczenie w

różnicowaniu etiologii tętniaka aorty brzusznej i

miażdżycowej niedrożności aortalno-biodrowej.

Czy istnieją różnice w występowaniu przeciwciał

przeciwko różnym białkom strukturalnym

H. pylori

surowicy krwi w badanych grupach chorych, a także

czy istnieją różnice w występowaniu bakterii

H. pylori,

w tym szczepów bardziej wirulentnych Cag A

dodatnich, w błonie śluzowej żołądka grupy chorych z

tętniakiem

aorty

brzusznej

niedrożnością

tętniakiem

aorty

brzusznej

niedrożnością

miażdżycową aortalno-biodrową oraz grupy kontrolnej.

Materiał

60 chorych operowanych z powodu TAB i NAB

30 chorych

TAB

30 chorych

NAB



wiek chorych: 41-81 lat (62,9 ± 9,1 lat)



M - 56



K - 4

Antybiotyki

PPI

- blokery

w ciągu

ostatnich 6

miesięcy

nie stosowane

Materiał

TAB

(n=30)

NAB

(n=30)

Poziom

istotności

Płeć M/K

27/3

29/1

Średnia wieku

67,4±8,1

58,5±7,3

p<0,001

Średnica tętniaka

60,9±11,6

Choroba

niedokrwienna serca

15 (50%)

17 (56,7%)

Nadciśnienie tętnicze

16 (53,3%)

15 (50%)

Cukrzyca

3 (10%)

5 (16,7%)

Hipercholesterolemia

3 (10%)

Palenie tytoniu

23 (76,7%)

21 (70%)

Charakterystyka badanej grupy -

porównanie

Charakterystyka grup

kontrolnych

Dla badań PCR

- aorty ze zwłok

(śr. do 30 mm)

Dla badań serologicznych

- surowice chorych bez

makro-skopowych cech miażdżycy ELISA i WESTERN

BLOT

(śr. wieku 59,0±11,2)

Dla

badań

endoskopowych,

Dla

badań

endoskopowych,

histopatologicznych, PCR

- oceniających kolonizację

H. pylori

żołądka

chorych

badanych

chorych

badanych

endoskopowo -bez miażdżycy naczyń (śr. wieku

60,1±10,6)

dolegliwości analogiczne do grupy badanej 60

Metodyka

Badania serologiczne

Metoda

ELISA

(zestaw Euroimmun, Niemcy)

ilościowo

60 surowic (grupa badana)

31 surowic (grupa kontrolna)

Przeciwciała IgG i IgA anty-

H. pylori

i anty-

pneumoniae

Metoda

WESTERN BLOT

(zestaw Euroimmun,

Niemcy) oceniono przeciwciała klasy IgA i IgG

przeciw cagA, vacA i 13 innym białkom

H. pylori

Metody

Badania molekularne PCR

Identyfikacja

C. pneumoniae

H. pylori

techniką

PCR

C. pneumoniae

- genomowy DNA uzyskany z aorty brzusznej

TAB

i NAB, amplifikacja

genu 16S r RNA

Chlamydia

pneumoniae

- 2 etap reamplifikacja z zastosowaniem

starterów

położonych wewnętrznie w stosunku do

poprzedniej pary starterów (ang.

nested PCR)

H. pylori

- amplifikacja

genu ure A

kodującego ureazę

pylori

oraz

genu cagA

cytotoksyczności

H. pylori

Przeciwciała klasy IgG, IgA przeciwko cagA, vacA i

innym białkom

Helicobacter pylori

oznaczono

zestawem testowym Western Blot

Pasmo

Antygen

Swoistość

120 kDa

cag A, p 120

białko zasocjowane z cytotoksyną A, wysoce swoiste

95 kDa

vac A, p 95

wakuolizująca cytotoksyna A, białko wysoce swoiste

75 kDa

p 75

niska swoistość

67 kDa

FSH, p 67

białko rzęskowe (flagellar sheath protein), niska swoistość

66 kDa

ure B, p 66

duża podjednostka enzymu ureazy, białko, niska swoistość

57 kDa

HSP, p 57

Homologiczne białko szoku termicznego, niska swoistość

54 kDa

białko rzęskowe, p 54 niska swoistość

50 kDa

p 50

niska swoistość

41 kDa

p 41

niska swoistość

33 kDa

p 33

prawdopodobnie swoiste

30 kDa

OMP, p 30

outer membrane protein, swoiste

29 kDa

ure A, p 29

mała podjednostka enzymu ureazy, swoiste

26 kDa

p 26

wysoce swoiste

19 kDa

OMP, p 19

outer membrane protein, swoiste

17 kDa

p 17

prawdopodobnie swoiste

13 kDa

p 13

niska swoistość

(ściana) 60 60

Występowanie DNA

H. pylori

C. pneumoniae

aortach TAB i NAB

Materiał do badań

DNA DNA

H. pylori

C. pneumoniae

(blaszka) 60 60

PCR razem 120 + 120

240 analiz

DNA C. pneumoniae (%) DNA H. pylori (%)

TAB

n=30

(80)

n=30

(0)

NAB

n=30

(76,6)

n=30

(0)

Razem

TAB i NAB

n=60

(78,3%

n=60

Kontrola

n=10

(0)

Wyniki identyfikacji prób techniką PCR sekwencji

DNA

C. pneumoniae

i DNA

H. pylori

w materiale

pochodzącym ze ścian aort zmienionych

chorobowo

i aort grupy kontrolnej

Wyniki badań DNA

C. pneumoniae

w blaszkach

miażdżycowych (B) i ścianie aorty (A)

w całej grupie badanej

TAB

(n=30)

NAB

(n=30)

Łącznie

TAB i NAB

(n=60)

Ściana aorty „A”

dodatnie

Blaszki miażdżycowe

„B” dodatnie

A i B dodatnie

A i B ujemne

A i/lub B dodatnie

lic

A+ i/lub B+

A+

B+

A+ i B+

TAB

NAB

Obecność DNA

C. pneumoniae

w badanym

materiale

z aort TAB i NAB

p<0,01

DNA

C. pneumoniae

występuje znamiennie

częściej w ścianie (

) NAB niż TAB (p<0,01).

DNA

C. pneumoniae

znamiennie częściej

występuje w całej szerokości badanego materiału

aort zmienionych (

) i (

) NAB niż TAB (p<0,01).

Częściej infekcja dotyczy całej grubości ściany.

TAB

NAB

(

)

DNA

C. pneumoniae

(

) i (

)

DNA

C. pneumoniae

(p<0,01)

DNA

C. pneumoniae

zmiany miażdżycowe (

)

ściana (A)

blaszki

aorty

(p<0,002)

Tętniak TAB

Przykład rozdziału elektroforetycznego w 2,5 % żelu agarozowym

(MetaPhor agarose FMC) produktów amplifikacji fragmentu genu

16S r RNA

Chlamydia pneumoniae

Oznaczenia: 1 – marker długości DNA pGEM DNA Markers (Promega

Co.), 2–5 – produkty amplifikacji DNA wyizolwoanego z wycinków

pooperacyjnych (2, 3, 5 – wynik pozytywny, 4 – wynik negatywny),

6 – kontrola negatywna ekstrakcji DNA, 7 – kontrola negatywna

reakcji PCR, 8 – kontrola pozytywna

Wyniki

Grupa chorych

Grupa kontrolna

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

0,167

0,97

0,203

1,18

0,182

1,06

0,178

1,03

0,181

1,05

0,739

4,30

0,275

1,60

0,391

2,27

0,362

2,10

0,275

1,60

29.

0,207

1,20

29.

0,125

0,72

30.

0,172

1,00

30.

0,124

0,72

31.

0,090

0,52

31.

0,149

0,87

58.

0,277

1,61

Wartość graniczna (cut off): 0,172

59.

0,235

1,37

(ekstynkcja powyżej – wynik dodatni)

60.

0,325

1,89

Ilościowa i jakościowa ocena przeciwciał IgG anty-

pneumoniae

w surowicy 60 badanych chorych oraz w surowicy 31 osób

z grupy kontrolnej

Grupa chorych

Grupa kontrolna

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

0,54

1,45

0,34

0,92

0,48

1,29

0,19

0,52

0,32

0,85

0,21

0,55

0,35

0,95

0,31

0,84

0,50

1,33

0,30

0,82

29.

0,53

1,43

29.

0,63

1,69

30.

0,16

0,44

30.

0,62

1,66

31.

0,24

0,65

31.

0,45

1,19

58.

0,26

0,71

Wartość graniczna (cut off): 0,37

59.

0,35

0,95

(ekstynkcja powyżej – wynik dodatni)

60.

0,31

0,83

Ilościowa i jakościowa ocena przeciwciał IgA anty-

pneumoniae

w surowicy 60 badanych chorych oraz w surowicy 31 osób

z grupy kontrolnej

Grupa badana (n=60)

85,0%

15,0%

IgG anty-C. pneumoniae dodatnie

IgG anty-C. pneumoniae ujemne

Porównanie występowania IgG anty-

C. pneumoniae

w surowicy grupy TAB/NAB i kontrolnej

Grupa kontrolna (n=31)

61,3%

38,7%

IgG anty-C. pneumoniae dodatnie

IgG anty-C. pneumoniae ujemne

p<0,02

TAB

96,6%

3,4%

IgG anty-C. pneumoniae dodatnie

IgG anty-C. pneumoniae ujemne

Częstość występowania przeciwciał IgG anty-

pneumoniae

w surowicy grup TAB i NAB

NAB

73,3%

26,7%

IgG anty-C. pneumoniae dodatnie

IgG anty-C. pneumoniae ujemne

p<0,01

Grupa badana (n=60)

58,3%

41,7%

IgA anty-C. pneumoniae dodatnie

IgA anty-C. pneumoniae ujemne

Porównanie obecności IgA anty-

C. pneumoniae

w surowicy grupy badanej i kontrolnej

Grupa kontrolna (n=31)

67,7%

32,3%

IgA anty-C. pneumoniae dodatnie

IgA anty-C. pneumoniae ujemne

TAB

53,3%

46,7%

IgA anty-C. pneumoniae dodatnie

IgA anty-C. pneumoniae ujemne

Porównanie obecności przeciwciał IgA anty-

pneumoniae

w surowicy grup TAB i NAB

NAB

63,3%

36,7%

IgA anty-C. pneumoniae dodatnie

IgA anty-C. pneumoniae ujemne

Grupa badana (n=60)

IgG C. pneumoniae

IgA C. pneumoniae

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

62,95

0,263

1,529

1,152

0,572

1,534

1,091

Odch. stand.

9,051

0,098

0,572

0,177

0,468

1,254

1,271

Współ. zmien.

0,144

0,374

0,153

0,817

0,248

Minimum

0,052

0,302

0,480

0,134

0,359

0,555

Maksimum

0,555

3,227

1,509

2,842

7,619

1,882

Grupa kontrolna (n=31)

IgG C. pneumoniae

IgA C. pneumoniae

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

59,00

0,253

1,469

1,098

0,597

1,600

1,106

Odch. stand.

11,188

0,144

0,840

0,256

0,506

1,357

0,268

Współ. zmien.

0,190

0,572

0,233

0,848

0,242

Minimum

0,041

0,238

0,377

0,194

0,520

0,716

Maksimum

0,739

4,297

1,633

2,380

6,381

1,805

FSNED

1,53

2,16

2,09

1,17

1,02

T-Studenta

1,80

0,39

1,16

-0,23

-0,25

T-Stud. (zm.)

1,70

0,35

1,05

-0,22

-0,25

DF (zm.)

Alfa

Porównanie wartości średnich stężeń przeciwciał

IgG, IgA anty-

C. pneumoniae

w grupie badanej i

kontrolnej

1,529

1,509

1,548

1,469

TAB/NAB

TAB

NAB

Kontrolna

Porównanie wartości średnich stężeń

przeciwciał anty-

C. pneumoniae

IgG

w grupach badanej (60) i kontrolnej (31)

łc

IgG

DNA

IgG

DNA

IgG

DNA

Ocena zależności pomiędzy wynikami uzyskanymi w

badaniu PCR fragmentów aorty (próbki A i B) i

wynikami badań serologicznych

C. pneumoniae

60 chorych

30 chorych TAB

30 chorych NAB

p<0,0001

p<0,05

Brak obecności DNA i p. ciał IgG C. pneumoniae
Obecność DNA i p. ciał IgG C. pneumoniae
Obecność p. ciał IgG C. pneumoniae
Obecność DNA C. pneumoniae

Grupa chorych

Grupa kontrolna

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

0,189

0,52

0,214

0,59

0,541

1,49

0,377

1,04

1,108

2,06

0,280

0,77

1,146

3,17

0,312

0,86

0,725

2,00

0,373

1,03

29.

0,709

1,96

29.

0,244

0,67

30.

0,144

0,40

30.

0,708

1,95

31.

0,731

2,02

31.

0,153

0,42

58.

0,948

2,62

Wartość graniczna (cut off): 0,362

59.

0,350

0,97

(ekstynkcja powyżej – wynik dodatni)

60.

0,868

2,40

Ilościowa i jakościowa ocena przeciwciał IgG anty-

H. pylori

w surowicy 60 badanych chorych oraz w surowicy 31 osób z

grupy kontrolnej

Grupa badana (n=60)

83,3%

16,7%

IgG H. pylori dodatnie

IgG H. pylori ujemne

Porównanie występowania IgG anty-

H. pylori

w surowicy grup TAB, NAB i kontrolnej

Grupa kontrolna (n=31)

61,3%

38,7%

IgG H. pylori dodatnie

IgG H. pylori ujemne

p<0,05

83,3%

16,7%

61,3%

38,7%

80,0%

20,0%

86,7%

13,3%

20%

40%

60%

80%

100%

Grupa badana

(n=60)

Grupa kontrolna

(n=31)

TAB (n=30)

NAB (n=30)

IgG H. pylori dodatnie

IgG H. pylori ujemne

Występowanie przeciwciał IgG anty-

H. pylori

w surowicach badanych grup

Grupa badana

Grupa kontrolna

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

Nr surowicy

chorego

Ekstynkcja

próbki

Współ. R

(Ratio)

Wynik

0,261

0,61

0,247

0,58

0,445

1,04

0,289

0,68

2,169

5,07

0,295

0,69

0,385

0,90

0,753

1,76

0,512

1,20

0,497

1,16

29.

0,621

1,45

29.

0,442

1,03

30.

0,160

0,37

30.

0,381

0,89

31.

0,412

0,96

31.

0,213

0,50

58.

0,802

1,87

Wartość graniczna (cut off): 0,428

59.

0,256

0,60

(ekstynkcja powyżej – wynik dodatni)

60.

0,443

1,04

Ilościowa i jakościowa ocena przeciwciał IgA anty-

H. pylori

w surowicach 60 chorych TAB i NAB oraz 31 z grupy

kontrolnej

Grupa badana (n=60)

58,3%

41,7%

IgA H. pylori dodatnie

IgA H. pylori ujemne

Porównanie obecności IgA anty-

H. pylori

w surowicy

w grupie badanej i kontrolnej

Grupa kontrolna (n=31)

41,9%

58,1%

IgA H. pylori dodatnie

IgA H. pylori ujemne

TAB

53,3%

46,7%

IgA H. pylori dodatnie

IgA H. pylori ujemne

Porównanie występowania przeciwciał IgA anty-

pylori

w surowicy w grupach TAB i NAB

NAB

63,3%

36,7%

IgA H. pylori dodatnie

IgA H. pylori ujemne

Porównanie wartości średnich stężeń przeciwciał IgG

anty-

H. pylori

w surowicy grupy badanej i kontrolnej

Grupa badana (n=60)

IgG H. pylori

IgA H. pylori

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

62,95

0,771

2,129

1,265

0,561

1,310

1,044

Odch. stand.

9,051

0,347

0,959

0,262

0,376

0,877

0,247

Współ. zmien.

0,144

0,450

0,207

0,670

0,236

Minimum

0,144

0,398

0,600

0,105

0,245

0,390

Maksimum

1,518

4,193

1,623

2,169

5,068

1,705

Grupa kontrolna (n=31)

IgG H. pylori

IgA H. pylori

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

59,00

0,602

1,664

1,131

0,477

1,114

0,991

Odch. stand.

11,188

0,360

0,995

0,293

0,334

0,781

0,197

Współ. zmien.

0,190

0,598

0,259

0,701

0,199

Minimum

0,153

0,423

0,626

0,213

0,498

0,697

Maksimum

1,429

3,948

1,596

2,129

4,974

1,697

FSNED

1,53

1,08

1,25

1,26

1,57

T-Studenta

1,80

2,14

2,19

1,03

1,02

T-Stud. (zm.)

1,70

2,14

1,08

1,10

DF (zm.)

Alfa

0,05

2,129

2,027

2,232

1,664

TAB/NAB

TAB

NAB

Kontrolna

Porównanie wartości średnich stężeń

przeciwciał

IgG anty-

H. pylori

w surowicy

grupy badanej (60) i kontrolnej (31)

p<0,05

p<0,02

łc

Porównanie wartości średnich stężeń IgG i IgA anty-

pylori

w grupach TAB i NAB

Grupa NAB (n=30)

IgG H. pylori

IgA H. pylori

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

58,467

0,808

2,232

1,299

0,561

1,310

1,061

Odch. stand.

7,270

0,318

0,880

0,234

0,294

0,688

0,221

Współ. zmien.

0,124

0,394

0,180

0,525

0,209

Minimum

0,189

0,522

0,718

0,188

0,439

0,643

Maksimum

1,518

4,193

1,623

1,428

3,336

1,523

Grupa TAB (n=30)

IgG H. pylori

IgA H. pylori

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

67,433

0,734

2,027

1,230

0,561

1,310

1,26

Odch. stand.

8,413

0,370

1,021

0,284

0,442

1,033

0,269

Współ. zmien.

0,125

0,504

0,230

0,788

0,262

Minimum

0,144

0,398

0,600

0,105

0,245

0,390

Maksimum

1,423

3,931

1,594

2,169

5,068

1,705

FSNED

1,34

1,35

1,46

2,26

1,47

T-Studenta

-4,34

0,82

1,00

0,00

0,55

T-Stud. (zm.)

-4,42

0,83

1,02

0,00

0,56

DF (zm.)

Alfa

0,001

Porównanie średnich stężeń przeciwciał

C. pneumoniae

w grupach:

TAB/NAB PCR DNA

C. pneumoniae

A(+), B(+), TAB/NAB PCR DNA

pneumoniae

A(-), B(-)

Grupa TAB/NAB A(+), B(+) (n=17)

IgG C.pneumoniae

IgA C. pneumoniae

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

61,647

0,270

1,571

1,168

0,494

1,324

1,029

Odch. stand.

8,519

0,098

0,568

0,156

0,424

1,136

0,255

Współ. zmien.

0,138

0,361

0,134

0,858

0,248

Minimum

0,134

0,779

0,892

0,437

0,640

Maksimum

0,465

2,703

1,432

5,370

1,730

Grupa TAB/NAB A(-), B(-) (n=13)

IgG C.pneumoniae

IgA C. pneumoniae

Wiek

Eks.

Log (IgG)

Eks.

Log (IgA)

Średnia

62,615

0,288

1,764

1,164

0,590

1,583

1,149

Odch. stand.

8,836

0,131

0,764

0,256

0,278

0,744

0,214

Współ. zmien.

0,141

0,456

0,220

0,470

0,187

Minimum

0,052

0,302

0,480

0,205

0,550

0,740

Maksimum

0,555

3,227

1,509

1,047

2,807

1,448

FSNED

1,08

1,81

2,68

2,33

1,42

T-Studenta

-0,29

-0,41

0,06

-0,69

-1,32

T-Stud. (zm.)

-0,30

-0,41

0,06

-0,75

-1,40

DF (zm.)

Alfa

Porównanie wartości średnich stężeń przeciwciał

klasy IgG

oraz IgA anty-

C. pneumoniae

w grupach (TAB; NAB)

w zależności od wyników badań PCR (DNA

pneumoniae

)

Grupa TAB/NAB B(-)

IgG

IgA

Grupa TAB/NAB B(+)

IgG

IgA

Grupa TAB A(-)

IgG

IgA

Grupa TAB A(+)

IgG

IgA

Grupa TAB B(-)

IgG

IgA

Grupa TAB B(+)

IgG

IgA

Grupa TAB/NAB A(-)

IgG

IgA

Grupa TAB/NAB A(+)

IgG

IgA

Grupa NAB B(-)

IgG

IgA

Grupa NAB B(+)

IgG

IgA

Grupa NAB A(-)

IgG

IgA

Grupa NAB A(+)

IgG

IgA

Grupa NAB B(+)

IgG

IgA

Grupa TAB B(+)

IgG

IgA

Grupa NAB A(+)

IgG

IgA

Grupa TAB A(+)

IgG

IgA

Ocena częstości występowania wyników zgodnych

przeciwciał IgG anty-

H. pylori

oraz IgG anty-

pneumoniae

w grupach TAB i NAB (60 osób) oraz kontrolnej (31

osób)

p<0,001

Obecność p. ciał IgG C. pneumoniae i H. pylori

Obecność p. ciał IgG C. pneumoniae

Obecność p. ciał IgG H. pylori

IgG

C. pneumoniae

IgG

H. pylori

IgG

C. pneumoniae

IgG

H. pylori

60 chorych TAB i NAB

31 osób - kontrolna

30 chorych TAB

30 chorych NAB

p<0,01

Obecność p. ciał IgG C. pneumoniae i H. pylori

Obecność p. ciał IgG C. pneumoniae

Obecność p. ciał IgG H. pylori

IgG

C. pneumoniae

IgG

H. pylori

p<0,001

IgG

C. pneumoniae

IgG

H. pylori

Ocena częstości występowania wyników zgodnych

przeciwciał IgG anty-

H. pylori

oraz IgG anty-

pneumoniae

w grupach TAB i NAB

Grupa badana

suro-

wicy

120

kDa

53.

56.

57.

58.

60.

Wyniki badań (metoda Western blot) obecności

przeciwciał skierowanych przeciwko różnym białkom

H. pylori

(IgG) w surowicy 50 chorych

H. pylori

dodatnich grupy TAB i NAB

Przykład jakościowego oznaczania in vitro ludzkich

przeciwciał klasy IgG w surowicy przeciwko bakteriom

Helicobacter pylori

- test Western Blot

Grupa kontrolna

suro-

wicy

120

kDa

10.

12.

25.

26.

27.

28.

30.

Wyniki badań (metoda Western blot) obecności

przeciwciał skierowanych przeciwko różnym białkom

H. pylori

(IgG) w 19 surowicach

H. pylori

dodatnich

grupy kontrolnej

wynik (+)

Stat-U

% dod. % dod.

120 kDa

1,98

0,05

98,0

84,2

95 kDa

1,58

58,0

36,8

75 kDa

0,22

18,0

15,8

67 kDa

3,61

0,001

78,0

31,6

66 kDa

0,66

98,0

94,7

57 kDa

8,44

0,0001

96,0

5,3

54 kDa

1,64

64,0

42,1

50 kDa

0,10

54,0

52,6

41 kDa

2,22

0,05

76,0

47,4

33 kDa

1,97

0,05

68,0

42,1

30 kDa

2,74

0,01

56,0

21,1

29 kDa

2,48

0,03

98,0

78,9

26 kDa

2,97

0,01

84,0

47,4

19 kDa

1,80

80,0

57,9

17 kDa

1,55

52,0

31,6

Porównanie wyników badań metodą Western blot

surowic

IgG anty-

H. pylori

grupy badanej (50) i kontrolnej (19)

przeciwko różnym białkom

H. pylori

Grupa badana (n=34)

TAK

64,7%

NIE

35,3%

Występowanie

H. pylori

w błonie śluzowej żołądka

w ocenie histopatologicznej

Grupa kontrolna (n=22)

TAK

45,5%

NIE

54,5%

Stopień

kolonizacji

H. pylori

Grupa badana

NAB/TAB

(n=34)

Grupa

kontrolna

(n=22)

Ocena

statystyczna

H. pylori wynik (-)

Ocena częstości występowania i stopnia

kolonizacji przez

H. pylori

błony śluzowej

części odźwiernikowej żołądka

Grupa badana (n=34)

TAK

32,0%

NIE

68,0%

Występowanie szczepów

H. pylori

cag A(+) w błonie

śluzowej żołądka w badaniu PCR

Grupa kontrolna (n=22)

TAK

40,0%

NIE

60,0%

Obok innych powszechnie uznanych czynników

Chlamydia pneumoniae

należy uważać za ważny

czynnik patogenetyczny w powstawaniu tętniaka aorty

brzusznej i miażdżycowej niedrożności aortalno-

biodrowej, za czym przemawia stwierdzenie obecności

DNA tej bakterii w ścianie aorty, natomiast mało

prawdopodobny jest bezpośredni udział

Helicobacter

pylori

w patogenezie tych chorób, o czym świadczy

brak obecności DNA

H. pylori

w ścianie aorty.

Obecność przeciwciał IgG przeciw

Chlamydia

pneumoniae

w surowicy krwi może między innymi

świadczyć o obecności tej bakterii w aorcie brzusznej w

przebiegu

tętniaka

aorty

lub

miażdżycowej

przebiegu

tętniaka

aorty

lub

miażdżycowej

niedrożności aortalno-biodrowej.

Wnioski

Różnica pomiędzy odpowiedzią humoralną wobec

Helicobacter pylori

Chlamydia pneumoniae

polega na

częstszym występowaniu przeciwciał klasy IgG

skierowanym przeciwko tym bakteriom w grupie

chorych z tętniakiem aorty brzusznej i niedrożnością

miażdżycową aorty i tętnic biodrowych w porównaniu z

grupą kontrolną.

Badania serologiczne dotyczące

Helicobacter pylori

Chlamydia pneumoniae

wykazały jednakowo częste

występowanie przeciwciał skierowanych przeciwko tym

antygenom w obu grupach, z tętniakiem aorty

brzusznej i miażdżycową niedrożnością aortalno-

biodrową. Nie wskazuje to na różnice udziału

ocenianych bakterii w etiopatogenezie miażdżycy i

tętniaka aorty brzusznej.

Częstsze występowanie i wyższe średnie stężenie

przeciwciał IgG przeciw

H. pylori

oraz znamiennie

częstsze występowanie przeciwciał skierowanych

przeciwko różnym białkom występującym w strukturze

H. pylori

w surowicach chorych z tętniakiem aorty i

niedrożnością miażdżycową aorty i tętnic biodrowych,

ma związek z wcześniej przebytymi infekcjami

H. pylori

oraz wskazuje na możliwość znaczenia mechanizmu

immunologicznego tych białek, za czym przemawia

brak istotnych różnic występowania oraz stopnia

kolonizacji błony śluzowej żołądka bakterią

H. pylori

, w

tym bardziej wirulentnych szczepów typu I Cag A

dodatnich w grupie chorych z tętniakiem i

niedrożnością miażdżycową aorty oraz kontrolnej.

Powyższe fakty sugerują, że odpowiednio wczesna

diagnostyka i leczenie infekcji

H. pylori

może mieć

znaczenie w profilaktyce tętniaka aorty brzusznej i

miażdżycy aorty i tętnic biodrowych oraz powinna być

włączona między innymi do profilaktyki tych chorób.

Document Outline

Slide 1
Slide 2
Slide 3
Slide 4
Slide 5
Slide 6
Slide 7
Slide 8
Slide 9
Slide 10
Slide 11
Slide 12
Slide 13
Slide 14
Slide 15
Slide 16
Slide 17
Slide 18
Slide 19
Slide 20
Slide 21
Slide 22
Slide 23
Slide 24
Slide 25
Slide 26
Slide 27
Slide 28
Slide 29
Slide 30
Slide 31
Slide 32
Slide 33
Slide 34
Slide 35
Slide 36
Slide 37
Slide 38
Slide 39
Slide 40
Slide 41
Slide 42
Slide 43
Slide 44
Slide 45
Slide 46
Slide 47
Slide 48
Slide 49
Slide 50
Slide 51
Slide 52
Slide 53