Biofizyka

molekularna

III

Spektrometria
MS, CD i
fluorymetria

Techniki spektrometryczne w
badaniach biologicznych



Analityka biochemiczna ilościowa –
(spektrometria UV/Vis,
spektrofluorymetria)



Identyfikacja biomolekuł i ustalanie ich
struktury – CD, NMR, MS, rzadziej
spektrofluorymetria



Analizy in vivo – fluorymetria, EPR,
rzadziej UV/Vis

Spektrometria masowa (MS)



Identyfikacja masy molekularnej

substancji niskocząsteczkowych

oraz mniejszych biopolimerów



Proteomika, a zwłaszcza

identyfikacja sekwencji białek



Glikomika – identyfikacja składu

oligocukrów



Analiza kwasów tłuszczowych –

zastosowanie w taksonomii bakterii

Spektrometr masowy

Techniki
jonizacji

Jonizacja
elektronami
(Electron
Ionisation - EI) -
jonizacja przy
pomocy wiązki
elektronów w
próżni

Elektrorozpylanie

(Electrospray, ESI), rozpylanie
cieczy zawierającej badaną
substancję z igły, do której
przyłożono wysokie napięcie
(zwykle 1 – 5 kV) pod
ciśnieniem atmosferycznym.
Metoda łagodna, nie
powoduje fragmentacji
badanych cząsteczek. Typowa
do stosowania z
biopolimerami.

Desorpcja laserowa z udziałem matrycy (Matrix

Assisted Laser Desorption Ionisation - MALDI) - w której
stosuje się jonizację laserową, ale z tak dobraną energią
wiązki, aby nie doprowadzać do fragmentacji cząsteczek
(łagodna metoda jonizacji), lecz tylko do ich "wybijania" ze
specjalnie przygotowanej matrycy.. Typowa do stosowania z
biopolimerami.

Techniki analizy jonów – MALDI-
TOF

Analizator czasu przelotu (Time Of Flight TOF) - jony
wprowadzane do analizatora są przyspieszane przy pomocy
impulsu elektrycznego. Na końcu analizatora znajduje się detektor
jonów (powielacz elektronowy lub fotopowielacz) połączony z
urządzeniem rejestrującym czas od impulsu przyspieszającego do
momentu uderzenia określonego jonu w detektor. Ze wzrostem
masy cząsteczkowej jonów, wydłuża się ich czas przelotu.