Metody diagnostyki
zakażeń wirusowych
i techniki badań
wirusologicznych
Metody diagnostyki
zakażeń wirusowych
i techniki badań
wirusologicznych
1.
Bezpośrednie wykrywanie
zakażeń wirusowych przez:
Stwierdzenie obecności (izolacja) i
identyfikacja wirusa
Stwierdzenie obecności wirusowego
antygenu
Stwierdzenie obecności wirusowego kwasu
nukleinowego
Wykazanie swoistej funkcji - zakaźności
2.
Pośrednie wykrywanie zakażeń
wirusowych
wykrycie i badanie poziomu
specyficznych przeciwciał
antywirusowych
badanie aktywności mechanizmów
odpornosci komórkowej
Izolacja i namnażanie
Identyfikacja
Wirusa izolowanego in
vitro
W materiale bezpośrednim
Izolacja i namnażanie
wirusów kręgowców
Izolacja i namnażanie wirusów
kręgowców
1.Materiał używany do izolacji wirusów:
płyny ustrojowe
wydaliny i wydzieliny
zeskrobiny
płyny ze zmian pęcherzowych
skrawki śródoperacyjne i bioptaty
próbki tkanek pobierane post mortem
2. Sposoby namnażania wirusów:
w zwierzętach laboratoryjnych (próba
biologiczna)
w zarodkach ptaków
w hodowlach komórkowych
Namnażanie wirusów w zwierzętach
laboratoryjnych
1.
Zwierzęta używane do
eksperymentów:
małe gryzonie (myszy, szczury, chomiki)
króliki
naczelne (rhesusy i szympansy)
Namnażanie wirusów w zwierzętach
laboratoryjnych
2. Drogi podawania materiału
zakaźnego:
domózgowo
dootrzewnowo
donosowo
dożylnie
domięśniowo
1.
Zarodki używane do zakażeń:
najczęściej stosowane są 7-11
2. Drogi podawania materiału
zakaźnego:
na błonę kosmówkowo-omoczniową
do jamy owodni
do woreczka żółtkowego
do ciała zarodka (dożylnie,
domózgowo)
Namnażanie wirusów w zarodkach
ptaków
Objawy wirusowego zakażenia
zarodka kury:
zmiany w wyglądzie ciała zarodka
(przekrwienia, wybroczyny, deformacje)
często śmierć zarodka
wirusowe ogniska na błonach zarodka
zmiany właściwości płynów w jaju (np. mogą
nabierać właściwości hemaglutynujących)
czyli
zlepianie czerwonych
krwinek za pośrednictwem
wirusa w widoczne gołym
okiem agregaty
Namnażanie wirusów w
1.
Rodzaje hodowli stosowanych do
namnażania wirusów:
pierwotne
półciągłe
ciągłe
2.
Źródła komórek używanych do
hodowli komórkowych:
tkanki embrionalne
tkanki nowotworowe
tkanki dojrzałe
Normalna hodowla fibroblastów za
rodka kury
Przejawy zakażenia hodowli
komórkowej – efekt cytopatyczny
CPE
(łysinka)
Identyfikacja wirusa
W materiale bezpośrednim
Izolowanego in vitro
Badanie mikroskopowe
mikroskop świetlny – ciałka
wtrętowe cytoplazmatyczne i
wewnątrzjądrowe
mikroskop elektronowy - wiriony
Wewnątrzjądrowe ciałka wtrętowe w komórkach linii ED (skóry
konia) podczas zakażenia herpeswirusem typu 2 (EHV-2)
S
Immunofluorescencja
W skrawkach mrożeniowych
Immunofluorescencja
W zakażonych hodowlach komórkowych
Techniki immunoenzymatyczne
Wykrywanie i analiza kwasów
nukleinowych
PCR
hybrydyzacja
analiza restrykcyjna
Nested PCR
Hybrydyzacja
In situ w skrawku
histopatologicznym
Hybrydyzacja
In situ w hodowli
komórkowej
Hybrydyzacja
Na membranie
Analiza restrykcyjna
