uzyskanie wysokocz
ą
steczkowego DNA przy
jednoczesnym oczyszczeniu preparatu DNA
z białek i inhibitorów enzymów
reakcja PCR (Polymerase Chain Reaction)
klonowanie
sekwencjonowanie
transformacja bakterii
transfekcja komórek
analiza restrykcyjna
bakterie
komórki ro
ś
lin
komórki zwierz
ą
t
komórki człowieka
- krew obwodowa (limfocyty)
- komórki płynu owodniowego (AFC)
- komórki kosmówki (CVS)
- hodowle fibroblastów
- hodowle fibroblastów
- komórki epitelialne
- cebulki włosów
- plamy krwi, nasienia
- fragmenty tkanek
- szpik kostny
izolacja DNA z zastosowaniem fenolu
i chloroformu w celu odbiałczenia preparatów
izolacja DNA przebiegaj
ą
ca przez wysolenie
białek z lizatów komórek
izolacja DNA przez zwi
ą
zanie z no
ś
nikiem,
odmycie zanieczyszcze
ń
i uwolnienie DNA
liza komórek w celu preparacji j
ą
der komórkowych
dezintegracja otoczki j
ą
drowej (metody fizyczne, chemiczne
lub mechaniczne)
oczyszczenie DNA - oddzielenie DNA od innych struktur
komórkowych, cz
ą
steczek RNA i białek zwi
ą
zanych z DNA
wytr
ą
cenie DNA alkoholem: etylowym lub izopropylowym
1) namno
Ŝ
enie hodowli bakteryjnej
2) liza bakterii w
ś
rodowisku alkalicznym (pH 12)
2) liza bakterii w
ś
rodowisku alkalicznym (pH 12)
3) oczyszczenie plazmidowego DNA –
zastosowanie mieszaniny fenol:chloroform
zastosowanie izotiocyjanian guanidyny -
zwi
ą
zek chaotropowy słu
Ŝą
cy do denaturacji
białek
białek
oczyszczenia DNA z białek – zastosowanie
mieszaniny fenol:chloroform