Ćw. 7 Test zahamowania migracji makrofagów. 

 

• 

Cel:

 wykrycie jednej z cytokin, zwanej czynnikiem hamującym migrację (MIF – Migration 

Inhibitory Factor) 

•  Pobudzone antygenem (np. endotoksyną – LPS) monocyty i makrofagi wytwarzają cytokinę 

MIF  zatrzymującą  te  komórki  w  miejscu  infekcji.  Cytokina  ta  jest  miernikiem  odpowiedzi 
komórkowej na dany antygen. 

•  Badanie wykonuje się w rurkach kapilarnych, w których obecne są leukocyty izolowane z krwi 

lub wysięku otrzewnowego. 

• 

Jeśli brak jest antygenu

, to komórki ruchliwe (makrofagi i monocyty) wędrują z kapilary do 

otaczającego środowiska. 

• 

Dodanie do płynu hodowlanego swoistego antygenu

 skutkuje wydzielaniem przez uczulone 

limfocyty T cytokiny MIF, a co za tym idzie zahamowanie migracji makrofagów. 

 

 

Mierząc strefy zajęte przez wędrujące komórki w próbie badanej i kontrolnej, można określid stopieo 
zahamowania ich migracji (MII – Migration Inhibitory Index) korzystając ze wzoru: 

% zahamowania migracji makrofagów: 

średni obszar migracji w obecności antygenu 

          średni obszar migracji bez antygenu  

 

 

 

 

Wykonanie: 

1.  Komory do testu przemyd alkoholem i wytrzed jałową gazą. 

2.  Z jednej strony nakleid (smar silikonowy) szkiełko nakrywkowe. 

3.  Nakłud palec jałową igłą. 

4.  Wprowadzid krew do dwóch kapilar na wysokośd około 1cm. 

5.  Pusty koniec kapilary zatopid w płomieniu palnika i odwirowad przez 7 min przy 500xg w 

wirówce hematokrytowej. 

6.  Po odwirowaniu uciąd kapilarę na granicy płynu i osadu komórek. 

7.  Odcięte kapilary przykleid częścią zatopioną do dna komory smarem silikonowym. 

8.  Jedno oczko komory wypełnid płynem Eagle‘a bez antygenu (

kontrola

), drugie - płynem 

Eagle‘a z dodatkiem antygenu (

próba badana

). 

9.  Oczka komory zakleid szkiełkami nakrywkowymi, a otwory boczne zakleid parafiną. 

10. Płytki umieścid w wilgotnej komorze i inkubowad przez 24h w 37

o

 C.