Biochemia – sprawozdanie 7



8.2.1. Oznaczanie aktywności β-amylazy metodą Noeltinga i Bernfelda w
ziarnie pszenicy

 Opis doświadczenia



1 g ześrutowanego ziarna pszenicy (oraz jęczmienia, pszenżyta i owsa w

osobnych próbach) zalewamy 200 cm

3

wody destylowanej



Dokładnie mieszamy, wytrząsamy co 5 minut i po 30 minutach przesączmy,

wylewając pierwsze partie przesączu



1cm

3

wyciągu badanej β-amylazy przenieść do probówki umieszczamy w łaźni

wodnej o temperaturze 20 stopni Celsjusza



Dodajemy 1cm

3

roztworu badanej skrobi, uprzednio doprowadzonej do

temperatury 20 stopni Celsjusza



Po 180 sekundach dodajemy 2 cm

3

odczynnika



Probówkę zanurzamy na 5 minut we wrzącej łaźni wodnej



Oziębiamy pod bieżąca woda i rozcieńczamy 20 cm

3

wody



Wykonujemy próbę kontrolna gdzie, zamiast skrobi, używamy 1 cm

3

wody.

Najpierw dodajemy odczynnik, potem enzym



Porównujemy absorbancję otrzymanych wyników z wynikiem z próby

kontrolnej przy użyciu filtru zielonego S53 w kuwetach o średnicy 20 mm



Wartości ekstynkcji, wyrażone w mg maltozy, odczytujemy z krzywej

wzorcowej w sposób następujący;



Do 2 cm

3

roztworu, zawierającego maltozę w ilości od 0,2-2 mg dodajemy 2

cm

3

odczynnika



Mieszaniny umieszczamy na 5 minut we wrzącej łaźni wodnej, ochładzamy,
rozcieńczamy 20 cm

3

wody

 Porównujemy na fotokolorymetrze z próbą kontrolną



Obserwacje

Pod wpływem gotowania roztwory zmieniły barwę, w skali od jasno-pomarańczowego po
bardzo ciemny brąz. Ciemniejszą barwę zaobserwowaną przy większym stężeniu maltozy.

 Wzory

 Tabela i obliczenia

Lp.

Stężenie maltozy

[mg/cm

3

]

T

1

[%]

T

2

[%]

T

średnie

[%]

Próba kontrolna

0

0

0

0

1.

0,2

0,04

0,04

0,04

2.

0,4

0,12

0,09

0,105

3.

0,6

0,21

0,22

0,215

4.

1,2

0,38

0,37

0,375

5.

1,6

0,57

0,5

0,535

6.

2,0

0,74

0,59

0,665

Wartości transmitancji dla;

pszenica- 0,63 -> 1,875
jęczmień- 0,18 -> 0,275
pszenżyto- 0,27 -> 0,8
owies- 0,27 -> 0,8

Obliczenia;

1 cm

3

przesączu – 5 mg mąki

200 cm

3

przesączu - 1000 mg mąki

1,875 mg maltozy – 1 cm

3

przesączu

375 mg maltozy – 200 cm

3

przesączu

0,275 mg maltozy – 1 cm

3

przesączu

55 mg maltozy – 200 cm

3

przesączu

0,8 mg maltozy – 1 cm

3

przesączu

160 mg maltozy – 200 cm

3

przesączu

Aktywność β-amylazy wyniosła 435,192 mg maltozy na 1 g suchego ziarna pszenicy, 55g dla
jęczmienia i 160 g dla pszenżyta i owsa.

 Wnioski

Rozbieżne wyniki w innych grupach świadczą o tym, że wartość dla próby
kontrolnej, oznaczona na fotokolorymetrze, nie jest wartością absorbancji, lecz
transmitancji (wartość dla próby kontrolnej nie została oznaczona jako 100%, lecz
jako 0%).

http://notatek.pl/oznaczanie-aktywnosci-amylazy-w-pszenicy?notatka