

 

Izolacja limfocytów ze śledziony: 



 

Ułożyć mysz na prawym boku. 



 

Odkazić skórę etanolem. 



 

Naciąć a następnie odciągnąć skórę. 



 

Przeciąć otrzewnę i  uwidocznić śledzionę. 



 

Wyciąć śledzionę (nożyczki i pęsetka). 



 

Umieścić śledzionę na szalce Petrie’go  z 10% MEM. 



 

„Wyczesać” śledzionę igłą preparacyjną lub nożyczkami. 



 

Zebrać płyn (z limfocytami) do probówki. 



 

Odstawić zawiesinę na 15 min. w celu oddzielenia się większych fragmentów tkanki. 



 

Zebrać klarowny płyn do probówek. 



 

Wirować – 1500 rpm przez 5 min. 



 

Zlać supernatant. 



 

Osad komórek zawiesić w 0,5-1ml 10% MEM. 



 

Określenie żywotność limfocytów: 



 

Poprać próbkę zawiesiny komórek i rozcieńczyć 1:10 w PBS . 



 

Dodać 4 krople 0,1% wodnego roztworu błękitu trypanu. 



 

Kroplę zabarwionej zawiesiny nanieść na szkiełko podstawowe i nakryć szkiełkiem 
nakrywkowym. 



 

Policzyć 100 komórek, określając jaki procent komórek zabarwił się koloidowym 
barwnikiem (są to komórki martwe). 



 

Wynik wyrazić w procencie żywych komórek.