Wyznaczanie  kinetyki  procesów  enzymatycznych  poprzez  pomiar 

szybkoœci 

zu¿ycia 

tlenu 

przez 

mikroorganizmy 

(aktywnoœã 

oddechowa). 

Wprowadzenie 

 

Jednym  z  wygodniejszych  sposobów  pomiaru  aktywnoœci  oddechowej  osadu  czynnego  jest  u¿ycie 

zestawu skùadaj¹cego siê z sondy tlenowej, tlenomierza i rejestratora. Zasada pomiaru jest nastêpuj¹ca: specjalne 
naczynie  pomiarowe  wyposa¿one  w  szczeln¹  przykrywkê  z  miejscem  na  zamocowanie  sondy  tlenowej 
caùkowicie  wypeùniamy  badanym  osadem  tak,  aby  wewn¹trz  nie  byùo  powietrza.  Sygnaù  z  sondy  tlenowej 
umieszczonej  w  naczyniu  pomiarowym  jest  wysyùany  do  tlenomierza,  którego  wskazania  w  sposób  ci¹gùy 
odwzorowywane s¹ na taœmie rejestratora. Poùo¿enie pisaka rejestratora odpowiada chwilowemu stê¿eniu tlenu 
w  naczyniu  pomiarowym  (mg O

2

/dm

3

).  Taœma  rejestratora  przesuwa  siê  z  zadan¹  prêdkoœci¹  (np.  1 cm/min). 

Dziêki temu mo¿na w prosty sposób wyznaczyã szybkoœã zmian stê¿enia tlenu w naczyniu (mg O

2

/dm

3

ÿh), czyli 

aktywnoœã oddechow¹. 

Sprzêt i odczynniki 



zestaw do pomiaru aktywnoœci oddechowej: 


naczynie pomiarowe z sond¹ tlenow¹, 



tlenomierz, 



rejestrator, 



mieszadùo magnetyczne; 



roztwór glukozy lub innego ùatwo przyswajalnego substratu, 



strzykawka 

Wykonanie doœwiadczenia 

 

Wykonaã pomiary aktywnoœci oddechowej dla ró¿nych stê¿eñ substratu, mierz¹c za ka¿dym razem: 



aktywnoœã podstawow¹ 



aktywnoœã po wprowadzeniu substratu 

 

Iloœã pomiarów oraz stê¿enia podaje prowadz¹cy zajêcia. 

Opracowanie wyników 

1. Wypeùniã tabelê wyników dla ka¿dego pocz¹tkowego stê¿enia substratu: 

Objêtoœã roztworu 

substratu wprowadzona 

do naczynia pomiarowego 

[ml] 

Stê¿enie substratu w 

naczyniu 

pomiarowym S [mg/l] 

Aktywnoœã oddechowa 

AO [mg O

2

/dm

3

ÿh] 

1/S 

1/AO 

 

 

 

 

 

3. Wykreœliã wykres zale¿noœci 1/AO od 1/S dla równania Lineweavera-Burka. Na podstawie wspóùczynników 
regresji liniowej wyznaczyã staù¹ Michaelisa K

m.

 i maksymaln¹ szybkoœã reakcji (akt. oddechow¹) AO

max

. (patrz 

rys. poni¿ej). 

4.  Sporz¹dziã  wykres  Michaelisa-Menten. 
Zaznaczyã  na  wykresie  wartoœci  K

m.

  i 

AO

max

. 

 

1/AO

1/S

-1/K

m

1/AO

max

  

id105417859 pdfMachine by Broadgun Software  - a great PDF writer!  - a great PDF creator! - http://www.pdfmachine.com  http://www.broadgun.com