Ćwiczen
ie
6b
. M
ikr
o
b
io
lo
gia
o
gó
ln
a iśro
d
o
wi
sk
o
wa
. P
rz
yg
o
to
wa
ł:
Ja
kub
Baran
ek
1
Ćwiczenie 7 (MOiŚ)
T: Identyfikacja bakterii do gatunku na podstawie ich właściwości fizjologicznych i biologicznych.
1) Szeregi biochemiczne – metoda klasyczna
2) Szybkie testy biochemiczne typu API
W identyfikacji wykonuje się co najmniej 20 testów biochemicznych. Czasami należy wykonać nawet 50
ponieważ tylko 90% szczepów wykazuje wszystkie typowe cechy gatunku. Duża uciążliwość w
przygotowywaniu podłoży i samej identyfikacji spowodowała opracowanie szybkich testów
identyfikacyjnych. Jedną z największych firm produkujących takie testy jest API.
1) Testy API
Oparte na identycznych podłożach i odczynnikach co tradycyjne testy ale wszystkie składniki
podłoża są w formie zliofilizowanej i umieszczone są w niewielkich minikuwetkach. Kuwetki te
ukształtowane są w plastikowej kasetce. Całość umieszczona jest w rynience.
Wyróżniamy rozmaite testy API:
API 20 E - I
DENTYFIKACJA BAKTERII Z RODZINY
E
NTEROBACTERIACEAE W OPARCIU O
20
CECH
BIOCHEMICZNYCH
API 20 STREP - I
DENTYFIKACJA BAKTERII Z
G
RUPY STREPTOCOCCUS W OPARCIU O
20
CECH
BIOCHEMICZNYCH
API 20 STAPH - I
DENTYFIKACJA BAKTERII Z
G
RUPY STAPHYLOCOCCUS W OPARCIU O
20
CECH
BIOCHEMICZNYCH
API 20 NE – non Enterobacteriaceae
API 50 CHB – I
DENTYFIKACJA BAKTERII Z
G
RUPY
B
ACILLUS W OPARCIU O
50
CECH
BIOCHEMICZNYCH
API RAPID – odczyt następuje już po 4 godzinach ale czułość identyfikacji jest nieco gorsza
Procedura identyfikacji za pomocą testów API
1. Inokulacja:
a) otrzymujemy 24 godzinną hodowlę mikroorganizmów na podłożu stałym
b) kolonię bakteryjną zawieszamy w 5 ml 0,85% NaCl
c) umieszczamy zawiesinę w dołkach wg instrukcji producenta (rys.1)
Do wszystkich dołków wlewamy pipetą zawiesinę tak, żeby nie wtłoczyć pod
plastikowe osłonki pęcherzyków powietrza.
Zawiesinę wlewamy tylko pod plastikowe osłonki, pozostawiając „miseczki” nie
zapełnione (patrz rysunek).
Testy, których oznaczenia otoczone są trzema kreskami zalewamy do końca
zawiesiną (aż do menisku wypukłego)
Testy, których oznaczenia są podkreślone pojedynczą kreską zalewamy parafiną aż
do menisku wypukłego.
Reszta testów pozostaje bez zmian.
d) Do rynienki wlewamy wodę, a następnie umieszczamy tam kasetkę z testami
e) inkubujemy 24-48 h w optymalnej dla danego organizmu temperaturze
