Oczyszczanie lakazy z Cerrena Unicolor
Karolina Linowska, Katarzyna Lisowska, Jakub Knurek
1. Wstęp teoretyczny:
- słowo na niedzielę (o lakazie – czemu to taki ważny enzym?)
- po co właściwie nam lakaza? Jaki proces ona katalizuje?
- jakimi sposobami można oczyścić lakazę?
- czym jest aktywność enzymatyczna? Jaką aktywność wykazuje lakaza? (parametry środowiska)
- reakcja lakazy z syrngaldazyną + opis
2. Omówienie stosowanej metody:
- chromatografia sitowa/ sączenie molekularne - jest mnóstwo artykułów i stron internetowych do
opracowania tej tematyki
3. Wykonanie:
- opis żelu Sephadex G-25 (dlaczego właśnie on jest używany do odsalania białek?)
- jak i po co wykonuje się kalibrację? (Blue Dextran/ dwuchromian potasu)
- zasada przygotowania buforów McIlvine’a (dlaczego wykonujemy tak dużo różnych buforów?)
- opis wykonania z uwzględnieniem zmienionych jednostek na ćwiczeniach (np. przy
spektrofotometrze factor = 2564, interwał = 15 s, czas trwania pomiaru = 60 zamiast 120 s, długość
fali – 525 nm, etc.)
- opis metody Leonowicz & Grzywnowicz – wystarczy wzór ze skryptu
- dlaczego używa się spektrofotometru i syryngaldazyny? (obserwacje)
- przypuszczalne wyniki oparte o źródła literaturowe
4. Wyniki:
- Tabela przedstawiająca aktywność w danym pH:
pH
Próbka nr I
Próbka nr II
Średnia wartość
3,5
- 27,39
- 1646,7
0
4,0
- 3212, 8
- 40,484
0
4,5
32258
54005
43131,5
5,0
47095
37864
42479,5
5,5
69117
70630
69873,5
6,0
71802
80716
76259
6,5
36821
39105
37963
7,0
11935
10659
11297
Wniosek: Optimum aktywności lakaza osiąga w ph 6,0.
- Wykres zależności aktywności lakazy od pH:
