•
CEL I ZAKRES BADAŃ
Celem doświadczenia było zapoznanie się z metodyką badań mikrobiologicznych przy
wykorzystaniu posiewu metodą płytkową Kocha (głębinową i powierzchniową).
•
METODYKA
1. Rozcieńczenie próbek
Do rozcieńczenia wykorzystujemy próbówki zawierające po 9 cm^3 jałowej wody buforowanej lub
płynu Ringera. Operacja ta polega na pobraniu jałową pipetą 1cm^3 pierwotnej próbki, dodaniu go
do jednej z próbówek i dokładnym wymieszaniu powstałego roztworu. Otrzymujemy w ten sposób
10-krotne rozcieńczenie próbki pierwotnej (10^-1). Aby uzyskać kolejne rozcieńczenia powtarzamy
powyższy schemat, jednak z tą różnicą, że do kolejnych probówek dodajemy po 1cm^3 probówki o
rozcieńczeniu o rząd niższym (pamiętając o wymieszaniu roztworu w próbówce tuż przed
pobraniem. Przygotowujemy rozcieńczenia 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5 i 10^-6.
2. Posiew na podłoże stałe metodą powierzchniową
Na powierzchnię zestalonego podłoża agarowego odżywczego zwykłego nakłada się jałową pipetą
0,1ml próbki o odpowiednim rozcieńczeniu, po czym dokładnie rozprowadza po powierzchni
pożywki za pomocą sterylnej głaszczki bakteriologicznej. Operację wyjałowienia wykonuje się za
pomocą palnika Bunsena.
3. Posiew na podłoże stałe metodą głębinową
Na dno jałowej płytki Petriego nakłada się za pomocą jałowej pipety 1ml roztworu o odpowiednim
rozcieńczeniu, po czym zalewa się ją podgrzaną do temperatury ok. 50oC pożywką stałą, następnie
delikatnymi okrężnymi ruchami szkiełka miesza się posianą próbkę z pożywką i odstawia się
próbki do zastygnięcia. Po zastygnięciu pożywki, płytki odwracamy do góry dnem. Zarówno
nakładanie materiału na szkiełko Petriego jak i wlewanie upłynnionej pożywki powinno być
wykonywane przy jak najmniejszym uchleniu wieczka szkieka.
Wszystkie operacje powinno się wykonywać z zachowaniem ostrożności dbając o to, by próbki nie
uległy zakażeniu. W tym celu należy zdezynfekować blat, posiewy wykonywać jak najbliżej
zapalonego palnika Bunsena, jak również opalać brzegi próbówek przy każdym pobraniu.
Szkiełka przetrzymywane są w termostacie w temperaturze 26oC przez okres 48 godzin.
Po przeprowadzeniu doświadczenia należy policzyć ilość kolonii w 1ml zawiesiny, co odpowiada
liczbie bakterii znajdującej się w danej objętości danego rozcieńczenia.
•
WYNIKI
GR
10^-3
10^-4
ŚREDNIA
10^-5
ŚREDNIA
10^-6
JTK/cm^3
głębinowy
nb
344
656
190
108
144
19
144*10^5
I
nb
110
120
115
11
nb
1,1*10^6
głębinowy
nb
408
388
89
72
80,5
6
7,4*10^6
II
nb
43
68
56
*
*
nb
nb
5,6*10^6
Rodzaj
posiewu
powierzchni
owy
powierzchni
owy
