UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09
- 1 z 2 -
Transferazy -transaminazy
aminotransferaza alaninowa i asparaginianowa
Zadanie 1
Celem zadania jest badanie aktywno
ś
ci AST i ALT.
Zasada oznaczenia
Metoda oznaczania aktywno
ś
ci AST i ALT oparta jest na ró
Ŝ
nicy
absorbancji 2,4-dwunitrofenylohydrazonów kwasu alfa oksoglutarowego i
pirogronowego w
ś
rodowisku zasadowym. W wyniku reakcji katalizowanej
przez
AST
powstaje
kwas
szczawiooctowy,
który
ulega
samoistnej
dekarboksylacji i tworzy si
ę
z 2,4-dwunitrofenylohydrazyn
ą
(DNFH) tak
Ŝ
e
hydrazon kwasu pirogronowego.
Miar
ą
aktywno
ś
ci aminotransferaz jest zatem przyrost st
ęŜ
enia
kwasu pirogronowego w probówkach inkubowanych z surowic
ą
w porównaniu z
probówkami kontrolnymi.
Reakcje katalizowane przez aminotransferazy:
ALT
alanina : 2-oksoglutaran
⇒
pirogronian : glutaminian
AST
aparaginian : 2-oksoglutaran
⇒
szczawiooctan : glutaminian
Wykonanie
Do 4 probówek: 1 (AST kontr.), 2 (AST bad.), 3 (ALT kontr.) i 4
(ALT bad.) dodawa
ć
wymienione w poni
Ŝ
ej zamieszczonej tabeli odczynniki
i surowic
ę
oraz wykonywa
ć
opisanie w niej czynno
ś
ci.
AST
ALT
Odczynniki
Kontrola
Badana
Kontrola
Badana
Substrat
Roztwór NaCl 0,9%
0,5
0,1
0,5
-
0,5
0,1
0,5
-
Inkubacja w ła
ź
ni
wodnej w temp. 37°C
5 min.
5 min.
Surowica ko
ń
ska
-
0,1
-
0,1
Inkubacja
30 min. w ła
ź
ni wodnej w
temp. 37°C
60 min. w ła
ź
ni wodnej w
temp. 3°C
DNFH
0,5
0,5
0,5
0,5
pozostawi
ć
w temp.
pokojowej na 20 min.
pozostawi
ć
w temp.
pokojowej na 20 min.
0,4 mol/dm
3
NaOH
5
5
5
5
