UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09
- 1 z 4 -
Dializa płynów ustrojowych, adsorpcja
dializa mleka, adsorpcja na w
ę
glu medycznym
Zadanie 1
Celem zadania jest przeprowadzenie dializy mleka oraz sprawdzenie
poprawno
ś
ci wykonania procesu poprzez oznaczenie składników roztworu
podializacyjnego.
Wykonanie
Otrzymany odcinek rury dializacyjnej z uwodnionej celulozy (NADIR),
długo
ś
ci ok. 25 cm i
ś
rednicy mikroporów 2,5-3,0 nm, zwil
Ŝ
y
ć
w wodzie
destylowanej. Jeden z ko
ń
ców tej rury skr
ę
ci
ć
i zawi
ą
za
ć
mocno nitk
ą
.
Do tak przygotowanego woreczka dializacyjnego nala
ć
dokładnie od-
mierzone 50 cm
3
mleka. Napełniony woreczek dializacyjny zawi
ą
za
ć
tak
Ŝ
e
z jego drugiej strony, pozostawiaj
ą
c nad warstw
ą
wypełnienia nieco wol-
nej przestrzeni. Spłuka
ć
wod
ą
destylowan
ą
z tryskawki t
ę
zewn
ę
trzn
ą
cz
ęść
woreczka, na której mogłyby pozostawa
ć
ewentualne
ś
lady mleka.
Woreczek przetrze
ć
do sucha skrawkiem ligniny lub bibuły.
Do zlewki odmierzy
ć
cylindrem dokładnie 150 cm
3
wody destylowanej i
w tej wodzie umie
ś
ci
ć
napełniony mlekiem woreczek dializacyjny.
Przez 30 minut prowadzi
ć
proces dializy w temperaturze pokojowej,
co pewien czas delikatnie poruszaj
ą
c woreczkiem.
Po zako
ń
czonej dializie wyj
ąć
woreczek ze zlewki i ponownie zmie-
rzy
ć
obj
ę
to
ść
roztworu w zlewce.
W roztworze podializacyjnym ze zlewki przeprowadzi
ć
próby jako
ś
cio-
we na obecno
ść
jonów: Cl
-
, Ca
2+
, PO
4
3-
oraz prób
ę
na obecno
ść
laktozy
(próba redukcyjna).
Wykona
ć
te
Ŝ
prób
ę
biuretow
ą
na obecno
ść
białka w roztworze podiali-
zacyjnym. Po ostro
Ŝ
nym otwarciu woreczka dializacyjnego pobra
ć
0,2 cm
3
mleka i po rozcie
ń
czeniu 0,8 cm
3
wod
ą
destylowan
ą
oznaczy
ć
st
ęŜ
enie
białka metod
ą
biuretow
ą
(wykonanie opisane ni
Ŝ
ej).
Wyniki oznacze
ń
zanotowa
ć
w tabeli.
Wykrywanie jonów Cl
-
Do 1 cm
3
roztworu podializacyjnego doda
ć
kroplami 0,5 cm
3
roztworu
0,1 mol/dm
3
Ag NO
3
.
W obecno
ś
ci jonów Cl
-
pojawia si
ę
biały, opalizuj
ą
cy AgCl.
Wykrywanie jonów Ca
2+
Do 1 cm
3
roztworu podializacyjnego doda
ć
0,5 cm
3
roztworu 0,2
mol/dm
3
szczawianu amonu (NH
4
)
2
C
2
O
4
lub 0,2 mol/dm
3
szczawianu potasu
K
2
C
2
O
4.
Wytr
ą
ca si
ę
krystaliczny osad szczawianu wapnia.
Wykrywanie jonów PO
4
3-
Do 1 cm
3
roztworu podializacyjnego doda
ć
5 kropli st
ęŜ
onego HNO
3
i
0,5 cm
3
roztworu 0.1 mol/dm
3
molibdenianu amonowego. Prób
ę
ogrza
ć
nad
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09
- 2 z 4 -
palnikiem kilka minut a
Ŝ
do pojawienia si
ę
Ŝ
ółtego osadu molibdeniano-
fosforanu amonowego.
Wykrywanie laktozy
Do 1 cm
3
roztworu podializacyjnego doda
ć
0,5 cm
3
odczynnika Fehlinga
I i 0,5 cm
3
odczynnika Fehlinga II. Prób
ę
ogrzewa
ć
do wrzenia a
Ŝ
pojawi
si
ę
Ŝ
ółty, pomara
ń
czowy lub czerwony osad tlenku miedzi(I) Cu
2
O.
Wykrywanie białka (próba biuretowa)
Do 1 cm
3
roztworu podializacyjnego doda
ć
4 cm
3
odczynnika miedziowe-
go.
Równolegle do tej próby wykona
ć
prób
ę
biuretow
ą
na białko zawarte w
mleku przed dializ
ą
: 0,2 cm
3
mleka, 0,8 cm
3
wody destylowanej i 4 cm
3
odczynnika miedziowego. Porówna
ć
wyniki oznacze
ń
białka w obu próbach
mleka.
Oznaczenie
Wynik
Wykrywanie jonów Cl
-
Wykrywanie jonów Ca
2+
Wykrywanie jonów PO
4
3-
Wykrywanie laktozy
Wykrywanie białka
Zadanie 2
Celem zadanie jest przeprowadzenie adsorpcji kwasów organicznych
(kwasu octowego) na w
ę
glu aktywnym w celu demonstracja leczniczych wła-
ś
ciwo
ś
ci carbo medicinalis
Wykonanie
Z kwasu octowego o st
ęŜ
eniu 0,5 mol/dm
3
przez rozcie
ń
czenie wod
ą
przygotowa
ć
roztwory CH
3
COOH o st
ęŜ
eniu 0,12 mol/dm
3
i 0,03 mol/dm
3
. W
tym celu do kolbek sto
Ŝ
kowych A i B odmierzy
ć
podane w tabelce obj
ę
to-
ś
ci kwasu i wody.
kolbka
CH
3
COOH
0,5 mol/dm
3
H
2
O
st
ęŜ
enie rozcie
ń
czenie
pH
A
12cm
3
38cm
3
0,12
~ 4 x
2,8
B
3cm
3
47cm
3
0,03
~ 16 x
3,2
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09
- 3 z 4 -
Z kolbki A pobra
ć
5 cm
3
roztworu kwasu octowego do nowej kolbki
sto
Ŝ
kowej oznaczonej np. 1, a z kolbki B pobra
ć
10 cm
3
roztworu do
kolbki oznaczonej np. 2.
Do kolbek 1 i 2 doda
ć
kilka kropli fenoloftaleiny, a nast
ę
pnie
miareczkowa
ć
mianowanym roztworem NaOH o st
ęŜ
eniu 0,1M. Obliczy
ć
rze-
czywiste st
ęŜ
enie otrzymanych roztworów kwasu octowego i porówna
ć
z ob-
liczonymi (w tabelce).
Do kolbek A i B doda
ć
1g w
ę
gla aktywnego (w
ę
giel dokładnie odwa
Ŝ
y
ć
na wadze), a nast
ę
pnie kolbki ostro
Ŝ
nie wytrz
ą
sa
ć
przez 30 minut. Za-
warto
ść
przes
ą
czy
ć
i pobra
ć
po 10 cm
3
zawarto
ś
ci do nowych kolbek sto
Ŝ
-
kowych oznaczonych np. 1` i 2` doda
ć
wska
ź
nika, miareczkowa
ć
mianowanym
roztworem NaOH. Obliczy
ć
st
ęŜ
enie kwasu octowego w kolbkach po adsorp-
cji.
Znaj
ą
c st
ęŜ
enie kwasu przed adsorpcj
ą
C
0
i po adsorpcji C obliczy
ć
liczb
ę
moli kwasu octowego, która została zaadsorbowana przez 1 gram
w
ę
gla aktywnego.
X
A
= (C
0
– C) * V
A
;
X
B
= (C
0
– C) * V
B
gdzie:
X –
liczba moli zaadsorbowanego kwasu,
V
– obj
ę
to
ść
roztworu, dla kolbki A V = 45 cm
3
, a dla kolbki B
V = 40 cm
3
c
o
–
st
ęŜ
enie kwasu przed adsorpcj
ą
, w mol/dm
3
.
c –
st
ęŜ
enie kwasu po absorpcji, w mol/dm
3
Wynik zanotowa
ć
w tabeli:
kolba
A
B
c
0
- st
ęŜ
enie kw. octowego
przed adsorpcj
ą
w mol/dm
3
c - st
ęŜ
enie kw. octowego
po adsorpcji w mol/dm
3
X - liczba moli kw. octowego zaad-
sorbowana na 1 g w
ę
gla aktywnego
Porówna
ć
wpływ st
ęŜ
enia kwasu octowego na zdolno
ś
ci adsorbcyjne
w
ę
gla aktywnego.
Notatki
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09
- 4 z 4 -
Notatki